应用激光捕获显微切割技术制备肺癌蛋白质组学研究样品

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1、应用激光捕获显微切割技术制备肺癌蛋白质组学研究样品作者：田应选　南岩东　杨拴盈【摘要】　　目的探讨应用激光捕获显微切割(lasercapturemicrodissection,LCM)技术获取高同质性肺癌组织细胞及正常对照肺泡上皮细胞的方法及可行性。方法将新鲜肺癌组织标本及其配对正常组织常规制备8μm冰冻切片，采用改良的HE方法染色；应用LCM技术大宗切割肺鳞癌、腺癌及正常对照肺泡上皮细胞；选择性获取同质肺癌细胞和配对正常细胞。结果通过LCM技术可以准确、快速地分离癌细胞、间质及其他坏死组织，得到同质性不低于9

2、5%的肿瘤细胞和正常细胞。按照Duration15.5s的激光脉冲频率和平均8000shots条件，既可保证每个帽子的细胞收集数量，也能够有效地缩短实验时间，提高实验可控性，从而使操作过程标准化。结论应用LCM技术可以成功获取同质肺癌细胞和正常细胞。其所需标本量少、组织同质性高、操作过程稳定、可控性好，是肺癌分子生物学及蛋白质组学研究有价值的样品制备方法。【关键词】激光捕获显微切割；肺癌组织；蛋白质组学　　Applicationoflasercapturemicrodissectiontocapturepure

3、cells　inlungcancerandtheirpairednormallungtissues11　　ABSTRACT:ObjectiveMicroheterogeneityisanimportantprobleminmolecularlybiologicalandproteomicresearchonmalignancies.Thegoalofthisstudywastoinvestigatethemethodtopurifytargetedcellsinlungcanceranditspairednor

4、maltissuesforproteomicstudyonlungcancerapplyinglasercapturemicrodissection(LCM).MethodsLCMtechniquewasemplogedtoobtainthecellsoflungcancertissuesandtheirpairednormaltissuesfromfrozensections.ResultsLCMcanbeappliedtoquicklyandpreciselyobtainpuretargetedcellss

5、ubgrouporsinglecellwithoutinterstitiumunderthemicroscope.ConclusionLCMcantackletheproblemoftissueheterogeneityinmolecularanalysissuccessfully.TheseresultsindicatethatLCMhasapotentialasatoolinlungcancerproteomicresearch.　　KEYWORDS:lasercapturemicrodissection;

6、lungcancertissue;proteomics　　蛋白质组学是当今肿瘤学研究领域中的一个热点，而“差异”蛋白质组学又是蛋白质组学研究的一个突破口。在有关“差异”11的研究中，若原始样品不是分别来自同一类型，或样品存在着杂质蛋白的污染，那么所得实验数据的准确性和说服力必然会受到影响[1]。众所周知，人体组织器官是多种细胞的复合，肿瘤组织的不均一性是肿瘤细胞的重要特征。因此，如何从复杂、不均一的样品中获得理想的高同质性的组分成为实验中亟需解决的主要问题之一。激光捕获显微切割(lasercapturemicr

7、odissection,LCM)技术的出现为上述问题提供很好的解决方案。该方法的突出特点是能在目视下从样品中特异挑选同类细胞乃至单一细胞；从而剔除间质细胞和坏死组织及其他可能影响结果分析的杂质成分[2]。本研究应用LCM针对不同类型组织标本，选择性获取同质肺癌细胞和配对正常细胞，以期探讨该方法在肺癌研究中的技术参数和操作流程。　　1材料与方法　　1.1标本的收集及制备收集西安交通大学医学院第二附属医院胸外科、陕西省人民医院胸心外科及陕西省肿瘤医院胸外科2005-2006年经病理诊断证实的手术切除肿瘤标本12例，

8、其中肺鳞癌6例，肺腺癌6例。正常对照组织为同一患者正常肺组织。12例患者中男性8例，女性4例；有吸烟史者5人，平均吸烟指数1900支/年；肿瘤分期：Ⅰ期2例、Ⅱ期7例(ⅡA3例，ⅡB4例)、Ⅲ期3例。所有病例标本均在手术室采集，具体操作如下：待组织标本离体后立即切取肿瘤组织，同时切取正常对照组织；4℃冰盐水冲洗3-5次，将血液冲净，均匀分割成0.2cm×0.2cm×110.2cm组织块