合欢花中槲皮苷的含量测定

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1、合欢花中槲皮苷的含量测定作者：王海岭，王清溪，黄洪勇，李恒芬【摘要】目的在临床前研究中，建立合欢不同部位中槲皮苷的含量测定方法。方法DiamonsilC18(4.6mm×250mm)色谱柱，流动相为甲醇-水(冰醋酸调pH3.2)=55∶45，流速为1.2ml·min-1，检测波长为256nm。结果槲皮苷在2.485～24.85μg·ml-1范围内线性关系良好(r=0.9998，n=7)，平均加样回收率为101.2%，RSD为1.4%。结论该方法定量简单、准确，可用于控制槲皮苷的质量。【关键词】合欢;槲皮苷;高效液相色谱法合欢花为豆科植物Albizziajulibr

2、issinDurazz的干燥花序，性平味苦。现代医学研究表明，合欢花具有解郁安神、活血消肿之功效，用于心神不安、忧郁失眠等症[1～3]。合欢花镇静催眠作用的有效成分为槲皮苷(quercitroside)[4]。本文建立了合欢花中槲皮苷的含量测定方法，以期为临床前研究中合欢花的质量控制提供依据。　　1仪器与材料　　美国Agilent61100高效液相色谱仪;瑞士XT-120A电子分析天平;上海LXJ-II离心沉淀机;中国上海科学院2X-91旋转蒸发仪;上海KQ-250TDE台式数控高频超声提取仪。　　槲皮苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号111538-20030

3、2);槲皮苷样品(自制，批号：080616，081018，081214);甲醇为色谱纯;其余试剂为分析纯;水为超纯水。　　2方法与结果　　2.1色谱条件DiamonsilC18(4.6mm×250mm)色谱柱，流动相为甲醇-水(冰醋酸调pH3.2)=55∶45，流速为1.2ml·min-1，检测波长为256nm，柱温30℃，满标进样20μl。　　2.2对照品液的制备称取经五氧化二磷干燥过夜的槲皮苷对照品约10mg，精密称定，流动相溶解并转移至100ml容量瓶中，定容，精密量取上述溶液1.0ml，置于10ml容量瓶中，流动相定容至刻度，即得0.01mg·ml-1的对

4、照品溶液。　　2.3供试品液的制备取供试品200mg，精密称定，加入甲醇100ml超声提取30min，提取液加压低温旋蒸浓缩，浓缩物以流动相溶解转移至50ml容量瓶中，流动相定容至刻度。进样前以0.22μm的两用微膜滤过，备用。6　　2.4检测波长的确定以对照品溶液在紫外全波段扫描，其在256nm，351nm处均有较强吸收。而256nm处吸收峰呈正态分布且灵敏度较高，故选定256nm为检测波长。　　2.5专属性考察在上述色谱条件下，其他杂质不干扰主峰的分离和测定，槲皮苷保留时间为11.15min。槲皮苷的有效塔板数为5800，拖尾因子1.02。见图1。　　2.6标

5、准曲线的制备分别精密量取对照品液0.20，0.40，0.60，0.80，1.00，1.50，2.00ml至10ml容量瓶，流动相定容至刻度，漩涡震荡摇匀，取适量于具塞尖底离心管中4000r/min离心10min，分别吸取上清液20μl进样。以质量浓度(C)为纵坐标，峰面积(A)为横坐标，进行线性回归，得标准曲线方程C=0.516×10-5A-0.145，(r=0.9998，n=7)，在2.485～24.85μg·ml-1范围内C与A呈良好的线性关系。　　a槲皮苷对照品b含槲皮苷样品　　图1槲皮苷的RP-HPLC图　　2.7精密度实验精密量取对照品溶液1ml，置

6、于10ml容量瓶中，流动相定容，按“2.6”项下同法处理，分别于0，15，30，45，60，120min测定槲皮苷含量，计算日内精密度;测定1次/d，共6次，计算日间精密度。结果日内RSD为0.58%;日间RSD为1.56%。6　　2.8重复性实验精密量取6份供试品溶液1ml，置于10ml容量瓶中，流动相定容，按“2.6”项下同法处理，测得含量的RSD为0.85%。　　2.9回收率实验以样品处理原液(33.37μg·ml-1)为对象，分别精密量取3份2.0ml置3支10ml容量瓶中，各加入槲皮苷对照品溶液(23.20μg·ml-1)1.0，2.0，3.0ml，定容

7、至刻度，按“2.6”项下同法处理。每个浓度平行处理3份，测定槲皮苷总含量。结果见表1。表1回收率实验结果　　2.10样品含量测定取各样品约200mg，按“2.3”项下处理，余按“2.6”项下同法处理。每批样品平行处理3份。结果见表2。表2样品的含量测定结果　　3讨论6　　以往槲皮苷的含量测定方法[5～7]普遍存在着样品前处理复杂、耗时、昂贵，流动相选择复杂，拖尾，保留时间过长等缺点，远不能适应槲皮苷的快速准确分析。而我们采用的RP-HPLC具有分析仪器普及率高、简便、价廉、快速、灵敏度高等优点，不仅可以用于在临床前研究中控制槲皮苷的质量，而且适用于含槲皮苷各种制剂

8、产品的定量