去甲雄三烯醇酮的化学修饰及其免疫原性的构建

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1、去甲雄三烯醇酮的化学修饰及其免疫原性的构建作者：周成林，苏兆亮，朱卫华，王胜军，李平，许化溪【摘要】　　目的：制备去甲雄三烯醇酮（又称群勃龙，trenbolone，TR）抗体以建立TR特异性检测方法。方法：TR与琥珀酸酐反应生成TR半琥珀酸酯（TRHS），采用混合酸酐法和对乙基N，N二甲基丙基碳二亚胺（EDC）法将TRHS与牛血清蛋白（BSA）偶联制备其偶联物；质谱、核磁共振分析偶联结果；免疫家兔并用双向免疫扩散和ELISA检测抗血清效价，判断偶联物的免疫原性。结果：经质谱鉴定显示，所获得的修饰物TRHS相对分子质量为370；核磁共振分析

2、表明，各吸收峰与理论相符；基质辅助激光解析电离飞行时间质谱图谱分析表明，TRBSA相对分子质量明显增加、紫外最大吸收峰漂移；TR与BSA混合酸酐法和EDC法偶联比分别为1∶18和1∶12；混合酸酐法偶联物免疫家兔获得的抗血清效价ELISA测得TR特异性抗体效价为1∶320000；双向免疫扩散测得的抗血清效价为1∶16。结论:成功制备了具有明显免疫原性的TRBSA偶联物，为TR单克隆抗体的制备和建立TR残留量的快速检测方法奠定了基础。【关键词】去甲雄三烯醇酮；半抗原修饰；偶联；基质辅助激光解析电离飞行时间质谱11　　［Abstract］Object

3、ive:Topreparetrenbolone(TR)completeantigenandidentifytheantigenicityofTR.Methods：TRhalfsuccinate(TRHS)wasproducedbyTRreactingwithsuccinicanhydride,themixedanhydrideandthe［3mercaptopropionicacid,1ethyl3(3diethylaminopropyl)carbodiimide，EDC］methodswereusedtocoupleTRHSand

4、BSA.TheantigenicityanalysisofTRBSAcomplexwasfinishedbydetectingthetitreofantiserumseparatedfromrabbitswhichwasimmunizedwithTRBSA.Results:TheTRHSmolecularweightwasdeterminedas370byanalysisofmassspectrometry,theabsorptionpeakwasinaccordancewiththeoreticalresultsbynuclearmagne

5、ticresonance.MALDITOFMSanalysisshowedthatthemolecularweightmapofTRBSAamarkedincreaseandtheUVmaximumabsorptionpeakdrift;thecouplingratiosofmixedanhydrideandEDCmethodwere1∶18and1∶12,respectively.TheresultsofELISAanddoubleimmunodiffusiontestshowedthatthetitreofantiserumtoTRwa

6、s1∶320000,1∶16,respectively.Conclusion:RBSAcouplingwassuccessfullyprepared,whichestablishedthefoundationfortheantiTRmonoclonalantibodypreparationaswellasthemethodconstructionofTRResiduesrapidtest.11　　［Keywords］trenbolone；haptenmodification；coupling；MALDITOFMS　　去甲雄三烯醇酮,又称群勃龙

7、(trenbolone，TR)，是人工合成的甾类男性激素，是家畜的生长促进剂，服用含该激素的肉制品会给人类的身体健康带来危害，同时也成为体育比赛兴奋剂的一个可能来源。欧盟禁止进口使用该类产品的食品，也是我国海关规定必须检测的31种兽药之一［1］。目前，TR在食品中残留量的检测主要依赖于质谱技术，如气相色谱质谱技术(GCMS)、液相色谱质谱技术(LCMS)等［2］。近年来，随着单克隆抗体技术、现代免疫测定技术的发展，建立方便于基层检验检疫部门应用的快速、灵敏的TR检测方法，对从源头上监测、控制此类物质的扩散具有重要意义［3］。TR是小分子化合物

8、，需要与大分子载体(蛋白质)偶联后才具有免疫原性。本研究采用琥珀酸酐对TR进行化学修饰，并将获得的TR半琥