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时间:2018-08-02
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1、去甲雄三烯醇酮的化学修饰及其免疫原性的构建作者:周成林,苏兆亮,朱卫华,王胜军,李平,许化溪【摘要】 目的:制备去甲雄三烯醇酮(又称群勃龙,trenbolone,TR)抗体以建立TR特异性检测方法。方法:TR与琥珀酸酐反应生成TR半琥珀酸酯(TRHS),采用混合酸酐法和对乙基N,N二甲基丙基碳二亚胺(EDC)法将TRHS与牛血清蛋白(BSA)偶联制备其偶联物;质谱、核磁共振分析偶联结果;免疫家兔并用双向免疫扩散和ELISA检测抗血清效价,判断偶联物的免疫原性。结果:经质谱鉴定显示,所获得的修饰物TRHS相对分子质量为370;核磁共振分析
2、表明,各吸收峰与理论相符;基质辅助激光解析电离飞行时间质谱图谱分析表明,TRBSA相对分子质量明显增加、紫外最大吸收峰漂移;TR与BSA混合酸酐法和EDC法偶联比分别为1∶18和1∶12;混合酸酐法偶联物免疫家兔获得的抗血清效价ELISA测得TR特异性抗体效价为1∶320000;双向免疫扩散测得的抗血清效价为1∶16。结论:成功制备了具有明显免疫原性的TRBSA偶联物,为TR单克隆抗体的制备和建立TR残留量的快速检测方法奠定了基础。【关键词】去甲雄三烯醇酮;半抗原修饰;偶联;基质辅助激光解析电离飞行时间质谱11 [Abstract]Object
3、ive:Topreparetrenbolone(TR)completeantigenandidentifytheantigenicityofTR.Methods:TRhalfsuccinate(TRHS)wasproducedbyTRreactingwithsuccinicanhydride,themixedanhydrideandthe[3mercaptopropionicacid,1ethyl3(3diethylaminopropyl)carbodiimide,EDC]methodswereusedtocoupleTRHSand
4、BSA.TheantigenicityanalysisofTRBSAcomplexwasfinishedbydetectingthetitreofantiserumseparatedfromrabbitswhichwasimmunizedwithTRBSA.Results:TheTRHSmolecularweightwasdeterminedas370byanalysisofmassspectrometry,theabsorptionpeakwasinaccordancewiththeoreticalresultsbynuclearmagne
5、ticresonance.MALDITOFMSanalysisshowedthatthemolecularweightmapofTRBSAamarkedincreaseandtheUVmaximumabsorptionpeakdrift;thecouplingratiosofmixedanhydrideandEDCmethodwere1∶18and1∶12,respectively.TheresultsofELISAanddoubleimmunodiffusiontestshowedthatthetitreofantiserumtoTRwa
6、s1∶320000,1∶16,respectively.Conclusion:RBSAcouplingwassuccessfullyprepared,whichestablishedthefoundationfortheantiTRmonoclonalantibodypreparationaswellasthemethodconstructionofTRResiduesrapidtest.11 [Keywords]trenbolone;haptenmodification;coupling;MALDITOFMS 去甲雄三烯醇酮,又称群勃龙
7、(trenbolone,TR),是人工合成的甾类男性激素,是家畜的生长促进剂,服用含该激素的肉制品会给人类的身体健康带来危害,同时也成为体育比赛兴奋剂的一个可能来源。欧盟禁止进口使用该类产品的食品,也是我国海关规定必须检测的31种兽药之一[1]。目前,TR在食品中残留量的检测主要依赖于质谱技术,如气相色谱质谱技术(GCMS)、液相色谱质谱技术(LCMS)等[2]。近年来,随着单克隆抗体技术、现代免疫测定技术的发展,建立方便于基层检验检疫部门应用的快速、灵敏的TR检测方法,对从源头上监测、控制此类物质的扩散具有重要意义[3]。TR是小分子化合物
8、,需要与大分子载体(蛋白质)偶联后才具有免疫原性。本研究采用琥珀酸酐对TR进行化学修饰,并将获得的TR半琥
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