何首乌提取物及其含药血清对mscs增殖的影响

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1、何首乌提取物及其含药血清对MSCs增殖的影响【摘要】目的探讨何首乌多糖、二苯乙烯苷及何首乌含药血清对骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖的影响。方法分离、培养大鼠MSCs，分别加入何首乌多糖、二苯乙烯苷及何首乌含药血清72h后，MTT法检测大鼠MSCs增殖情况。结果10-4mol/L二苯乙烯苷及10%何首乌含药血清对大鼠MSCs增殖的影响，与空白组及空白血清组比较，差异有显著性意义(P<0.05)，不同浓度的何首乌多糖对大鼠MSCs增殖影响不明显。结论二苯乙烯苷及何首乌含药血清可促进大鼠MSCs增殖。【关键词】何首乌;二苯乙烯苷;含药血清;骨髓间充质

2、干细胞;细胞增殖　Abstract：ObjectiveTodiscusstheeffectofPolygonummultiflorumpolysaccharide,tetrahydroxystilbeneglycosideandPohygonummutifilorummedicatedserumonproliferationofbonemarrow-derivedmesenchymalstemcells(MSCs).MethodsMSCswereisolatedfromratboneandculturedunderPolygonummultifloru

3、mpolysaccharide,tetrahydroxystilbeneGlycosideorpolygonummultiforummedicatedserumfor72h.Aftertheinduction,theproliferationeffectonMSCswasdetectedwithMTT.ResultsComparedwiththecontrolgroupandblankserumgroup,91×10-4mol/Ltetrahydroxystilbeneglucosideand10%Polygonummultiflorummedicat

4、edserumhadobviouseffectonratMSCs,andthedifferencewassignificant(P<0.05).ConclusionTetrahydroxystilbeneglucosideandPolygonummultiflorummedicatedserumcanpromotetheproliferationofMSCs.　　Keywords：Polygonummultiflorum;Tetrahydroxystilbeneglucoside;Medicatedserum;Mesenchymalstemcel

5、ls;Cellproliferation　　干细胞具先天之精属性，是先天之精在细胞层次的存在形式[1～3]。MSCs是存在于骨髓中的一类多能干细胞，是组织工程及细胞和基因治疗的重要靶细胞，但骨髓中MSCs的含量极少，必须在体外培养扩增才能满足要求。因此，我们的研究从补肾益精的中药何首乌入手，探讨何首乌有效成分、含药血清对MSCs增殖的影响，也为干细胞与肾精理论提供有力的药理学依据。　　1材料与仪器　　1.19药物何首乌多糖购自惠州仙草公司、二苯乙烯苷购自四川曼斯特公司、何首乌购自广州中医药大学附属第一医院中药房，临用时以低糖培养基配制。　　1.2动物S

6、D大鼠，雄性，体质量120～150g，用于MSCs细胞的提取;SD大鼠，雌性，体质量220～250g，用于含药血清的制备。由广东省医学实验动物中心提供，合格证编号：粤监证字2008A020。　　1.3试剂特级胎牛血清(Gbico，美国)、青/链霉素双抗、0.25%胰蛋白酶-EDTA、PBS缓冲液、DMEM低糖培养液(吉诺生物医药技术有限公司，杭州)、四甲基偶氮唑盐MTT、二甲基亚砜DMSO(Amresco，美国)。　　1.4仪器酶标仪(Bio-Rad，美国);二氧化碳孵育箱(ThermoForma，美国)。　　2方法　　2.1何首乌含药血清的制备常法制

7、备成含生药2g/ml的浓煎液，实验组的用药剂量相当于临床等效剂量(根据“实验动物与人按体表面积比等效计量换算比率表”[4]计算)的10倍，对照组灌服生理盐水。各组大鼠每日2次灌胃，连续3d灌胃后，第4天1次服用全天剂量。腹主动脉取血，离心取上清。56℃，30min灭活后，经0.22μm针头微孔滤器过滤除菌，-70℃9冰箱保存备用。从而制备出含药血清及对照血清。　　2.2含药培养基的制备称取80mg何首乌多糖，加入8mlDMEM培养基，搅拌使之充分溶解后，即成10mg/ml母液。称取二苯乙烯苷5mg，加入适量DMEM培养基，搅拌使之充分溶解后，即成10-

8、3mol/L母液。后续实验中根据需要稀释成相应的不同浓度含药培养基。用0.22μm针头滤器过滤