何首乌提取物及其含药血清对mscs增殖的影响论文

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1、何首乌提取物及其含药血清对MSCs增殖的影响论文【摘要】目的探讨何首乌多糖、二苯乙烯苷及何首乌含药血清对骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖的影响。方法分离、培养大鼠MSCs，分别加入何首乌多糖、二苯乙烯苷及何首乌含药血清72h后，MTT法检测大鼠MSCs增殖情况。结果10-4mol/L二苯乙烯苷及10%何首乌含药血清对大鼠MSCs增殖的影响，与空白组及空白血清组比较，差异有显著性意义(P0.05)，不同浓度的何首乌多糖对大鼠MSCs增殖影响不明显。结论二苯乙烯苷及何首乌含药血清可促进大鼠MSCs增殖。【关键词】何首乌

2、;二苯乙烯苷;含药血清;骨髓间充质干细胞;细胞增殖Abstract：ObjectiveTodiscusstheeffectofPolygonummultiflorumpolysaccharide,.freelmutifilorummedicatedserumonproliferationofbonemarroesenchymalstemcells(MSCs).MethodsMSCsratboneandculturedunderPolygonummultiflorumpolysaccharide,tetrahydro

3、xystilbeneGlycosideorpolygonummultiforummedicatedserumfor72h.Aftertheinduction,theproliferationeffectonMSCsgroup,1×10-4mol/Ltetrahydroxystilbeneglucosideand10%PolygonummultiflorummedicatedserumhadobviouseffectonratMSCs,andthedifferencemultiflorummedicatedserum

4、canpromotetheproliferationofMSCs.Keymultiflorum;Tetrahydroxystilbeneglucoside;Medicatedserum;Mesenchymalstemcells;Cellproliferation干细胞具先天之精属性，是先天之精在细胞层次的存在形式1～3。MSCs是存在于骨髓中的一类多能干细胞，是组织工程及细胞和基因治疗的重要靶细胞.freelresco，美国)。1.4仪器酶标仪(Bio-Rad，美国);二氧化碳孵育箱(ThermoForma，美国)

5、。2方法2.1何首乌含药血清的制备常法制备成含生药2g/ml的浓煎液，实验组的用药剂量相当于临床等效剂量(根据“实验动物与人按体表面积比等效计量换算比率表”4计算)的10倍，对照组灌服生理盐水。各组大鼠每日2次灌胃，连续3d灌胃后，第4天1次服用全天剂量。腹主动脉取血，离心取上清。56℃，30min灭活后，经0.22μm针头微孔滤器过滤除菌，-70℃冰箱保存备用。从而制备出含药血清及对照血清。2.2含药培养基的制备称取80mg何首乌多糖，加入8mlDMEM培养基，搅拌使之充分溶解后，即成10mg/ml母液。称取二苯

6、乙烯苷5mg，加入适量DMEM培养基，搅拌使之充分溶解后，即成10-3mol/L母液。后续实验中根据需要稀释成相应的不同浓度含药培养基。用0.22μm针头滤器过滤除菌，分装，-20℃避光保存。2.3MSCs的分离与培养颈椎脱臼处死大鼠，无菌条件下分层剥离后肢皮肤、附着肌肉，剪断胫、股骨的骨骺端，用10%胎牛血清的完全培养液反复冲洗骨髓腔。收集细胞悬液，接种于25cm2培养瓶中，置37℃、5%CO2恒温培养箱中培养;原代MSCs培养48h后进行首次换液，以后每3天换液1次。培养7～10d后，细胞铺满瓶底约80%～90

7、%。此时加入PBS缓冲液冲洗，再用0.25%的胰蛋白酶消化，制成单细胞悬液，接种于新培养瓶中进行扩增培养。常规按1∶2或1∶3比例传代。2.4MTT法细胞活性检测取生长良好的第3代MSCs，制备单细胞悬液，以1×104个/ml均匀地接种于一次性96孔培养板上，每孔200μl。24h细胞贴壁后吸弃培养基。何首乌多糖、二苯乙烯苷组依次加入用10%完全培养基配好的不同浓度含药培养基，空白组加10%完全培养基。空白血清组、何首乌含药血清组分别添加血清后，使各组血清浓度分别为培养液体积的5%，10%，15%，20%，25%，

8、30%。每组6个复孔。各组同时培养达72h，每孔加入MTT(5mg/ml)溶液20μl，继续培养4h，弃上清，每孔再加入DMSO150μl，振荡10min，选择490nm波长测定各孔光吸收值。3结果3.1何首乌多糖对MSCs增殖的影响何首乌多糖诱导培养72h后，与空白组相比，不同浓度何首乌多糖对MSCs的促增殖作用不明显(P0.05)。结果见表1。表1何首乌