体外诱导生成树突状细胞的成熟度和激活性研究

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1、体外诱导生成树突状细胞的成熟度和激活性研究作者：刘晓霞贾力品乔俊红【摘要】目的:探讨人外周血单核细胞体外培养树突状细胞（dendriticcell,DC）的成熟度和激活性。方法:从健康成人外周血分离单核细胞（PBM），加入粒单系集落刺激因子（GMCSF）1000U/ml、重组白细胞介素4（IL4）500U/ml，体外培养7d。然后加入肿瘤坏死因子a(TNFa)100ng/ml，体外培养3d。培养流式细胞仪分别测定两次DC的主要组织相溶性复合体（MHC）Ⅱ类分子和协同刺激分子，分析其成熟度和激活度。结果:PBM经GMCSF和IL4诱导培养7d后，细胞成

2、簇，表型为CD83226%、CD86555%、CD11c361%、CD6432%、人类白细胞抗原（HLA）DR134%；加入TNFa培养3d后，细胞表型为CD83815%、CD86993%、CD11c988%、CD6434%、人类白细胞抗原（HLA）DR833%。结论:GMCSF和IL4诱导培养PBM7d，可获得大量不成熟DC，该体系有利于DC扩增，加入TNFa继续培养3d后，DC成熟度高，激活性好。【关键词】树突状细胞；体外培养；成熟度；激活性【ABSTRACT】Objective:Tostudymaturityandactivationofden

3、driticcells(DC)inducedfromhumanperipheralblood8monocytes（PBM）.Methods:ThemonocytescollectedfromnomalperipheralbloodwereculturedwithGMCSF(1000U/ml)andIL4(500U/ml)for7days,thenculturedwithTNFα(100ng/ml)for3days.MHCⅡandcostimulatorymoleculesofDCwereanalyzedbyflowcytometryfortwotim

4、es,somaturity　andactivationofDCwereknownbythem.Results:CD83、CD86、CD11c、CD64、HLADRexpressionsinPBMwere226%、555％、361％、32％、134％afterPBMwereculturedwithGM-CSFandIL4for7days,buttheirexpressionsinPBMwere815%、993%、988％、34％、833％afterPBMwereculturedwithTNFαfor3days.Conclusion:DCinducedf

5、romPBMwithGMCSFandIL4for7dayswerenotmature,butthesysteminducementwasbeneficialtoexpansionofDC.CulturedwithTNFαfor3days,DCinducedformPBMwereverygoodinmaturityandactivation.【KEYWORDS】Dendriticcells;Cultureinvitro;Maturity;Activation树突状细胞（dendriticcell,DC）是体内最强的抗原提呈细胞，免疫反应的产生首先是由抗

6、原提呈细胞8（APC）捕获抗原，经其加工处理后将抗原信号传递给T、B淋巴细胞，从而引发一系列的免疫应答。因此，APC是机体免疫反应的首要环节，能否进行有效的抗原呈递直接关系到免疫激活和免疫耐受的诱导。成熟的DC启动免疫应答，而不成熟的DC参与免疫耐受的形成。DC通常从骨髓CD34+细胞和PBM培养获得。在此，我们探索了从PBM培养DC的成熟度和激活性的方法。1材料与方法11材料淋巴细胞分离液购自Sigma公司，丝裂酶素C购自Sigma公司，RPMI1640购自GIBCO公司，胎牛血清购自GIBCO公司，rhGMCSF、rhIL4、hTNFa购自R&a

7、mp;D公司，CD83、CD11c、CD64、CD86、HLADR、FITC标记兔抗鼠IgG荧光二抗购自华美生物工程公司。12方法121外周血单核细胞（PBM）的分离采集健康人外周血100ml，肝素抗凝，用淋巴细胞分离液分离出单个核细胞，RPMI1640悬浮后种于24孔板，置于37℃，5%的CO2培养箱中，培养3h，弃去悬浮细胞，贴壁细胞即为PBM，用于DC培养。122DC的培养含10%胎牛血清的RBMI1640悬浮PBM，1×8105/ml细胞种于24孔板，2ml/孔，加入GMCSF1000U/ml、IL4500U/ml置于37℃，5%的CO2培养

8、箱中，饱和湿度条件下培养7d，然后加入TNFa100ng/ml继续培养3d后，分别于7d和10d收集悬浮细胞