大鼠肾小球系膜细胞表型的增龄性变化

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1、大鼠肾小球系膜细胞表型的增龄性变化作者：卓莉蔡广研刘伏友傅博【摘要】目的观察大鼠肾小球系膜细胞随增龄细胞表型及功能的变化特点。方法取3、12、24月龄健康雄性Wistar大鼠原代系膜细胞进行培养，MTT法检测细胞增殖能力，进行SAβgal染色，采用RTPCR和Western印迹法分别检测p21WAF1/CIP1/SDI1基因及蛋白质的表达变化，并用免疫荧光法检测系膜细胞中p21WAF1/CIP1/SDI1的表达与定位。结果大鼠肾小球系膜细胞增殖能力随增龄逐渐减弱(P<0.05)，SAβ

2、gal染色阳性率随增龄逐渐增加(P<0.05)，p21WAF1/CIP1/SDI1mRNA及蛋白质表达随增龄逐渐增加(P<0.05)。免疫荧光结果示p21WAF1/CIP1/SDI1主要在细胞核内表达，荧光强度随增龄逐渐增强(P<0.05)。结论大鼠肾小球系膜细胞随增龄细胞形态、增殖能力与衰老相关蛋白表达发生明显改变，出现了复制性衰老表型。【关键词】系膜细胞；衰老；细胞表型；p21WAF1/CIP1/SDI1　　【Abstract】ObjectiveToinvestigateth

3、echaracteristicofratmesangialcellswithadvancingage.MethodsMaleWistarratsagedof3,12,24monthswereused.TheratmesangialcellswereprocessedforMTTassayandsenescence11associatedβgalactosidase(SAβgal)staining.Theexpressionandlocationofp21WAF1/CIP1/SDI1inmesa

4、ngialcellswerestudiedbyimmunofluorescence.ThemRNAandproteinlevelsofp21WAF1/CIP1/SDI1weredetectedbyWesternblotand/orRTPCR,respectively.ResultsTheabilityofproliferationwasdecreasedinratmesangialcellswithadvancingage(P＜0.05).Theexpressionofsenescenceasso

5、ciatedβgalactosidaseactivitywasincreasedinmesangialcellswithadvancingage.PercentagesofSAβgalstainingpositivecellswere(11.9±3.6)%versus(39.0±4.0)%versus(86.9±7.4)%(P＜0.05)inyoung,middleandagingglomerularmesangialcells.Thep21WAF1/CIP1/SDI1proteinshowe

6、dlocalizationinnucleusinmesangialcells,andthestainingintensityofp21WAF1/CIP1/SDI1inmesangialcellsinoldanimalswasmarkedlyincreased,ascomparedtothatinyoungandmiddleagerats(P＜0.05).ThemRNAlevelsofp21WAF1/CIP1/SDI1wassignificantlyincreasedinmesangialcellsi

7、noldanimals,ascomparedtothatattheageof3and12months,meanwhilethep21WAF1/CIP1/SDI1proteinsexpressionweredramaticallyincreasedwithadvancingage(P＜0.05).ConclusionsThecellularphenotypeandfunctionarechangedinratmesangialcellswithadvancingage.Theratmesangialc

8、ellsappearreplicativesenescencewithadvancing11age.　　【Keywords】Mesangialcells;Senescence;Phenotype；p21WAF1/CIP1/SDI1　　多数学者认为，器官衰老是由于其固有细胞功能减退所导致，肾小球系膜细胞作为肾脏最重要的固有细胞之一，具有调节肾血流量，分泌细胞外基质、炎症介质等功能，其表型和功能的改变在肾脏衰老进程中必然发挥着重要的作用。为了能客观真实地反映肾小球系膜细胞