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时间:2018-08-01
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1、大鼠肾小球系膜细胞表型的增龄性变化作者:卓莉蔡广研刘伏友傅博【摘要】目的观察大鼠肾小球系膜细胞随增龄细胞表型及功能的变化特点。方法取3、12、24月龄健康雄性Wistar大鼠原代系膜细胞进行培养,MTT法检测细胞增殖能力,进行SAβgal染色,采用RTPCR和Western印迹法分别检测p21WAF1/CIP1/SDI1基因及蛋白质的表达变化,并用免疫荧光法检测系膜细胞中p21WAF1/CIP1/SDI1的表达与定位。结果大鼠肾小球系膜细胞增殖能力随增龄逐渐减弱(P<0.05),SAβ
2、gal染色阳性率随增龄逐渐增加(P<0.05),p21WAF1/CIP1/SDI1mRNA及蛋白质表达随增龄逐渐增加(P<0.05)。免疫荧光结果示p21WAF1/CIP1/SDI1主要在细胞核内表达,荧光强度随增龄逐渐增强(P<0.05)。结论大鼠肾小球系膜细胞随增龄细胞形态、增殖能力与衰老相关蛋白表达发生明显改变,出现了复制性衰老表型。【关键词】系膜细胞;衰老;细胞表型;p21WAF1/CIP1/SDI1 【Abstract】ObjectiveToinvestigateth
3、echaracteristicofratmesangialcellswithadvancingage.MethodsMaleWistarratsagedof3,12,24monthswereused.TheratmesangialcellswereprocessedforMTTassayandsenescence11associatedβgalactosidase(SAβgal)staining.Theexpressionandlocationofp21WAF1/CIP1/SDI1inmesa
4、ngialcellswerestudiedbyimmunofluorescence.ThemRNAandproteinlevelsofp21WAF1/CIP1/SDI1weredetectedbyWesternblotand/orRTPCR,respectively.ResultsTheabilityofproliferationwasdecreasedinratmesangialcellswithadvancingage(P<0.05).Theexpressionofsenescenceasso
5、ciatedβgalactosidaseactivitywasincreasedinmesangialcellswithadvancingage.PercentagesofSAβgalstainingpositivecellswere(11.9±3.6)%versus(39.0±4.0)%versus(86.9±7.4)%(P<0.05)inyoung,middleandagingglomerularmesangialcells.Thep21WAF1/CIP1/SDI1proteinshowe
6、dlocalizationinnucleusinmesangialcells,andthestainingintensityofp21WAF1/CIP1/SDI1inmesangialcellsinoldanimalswasmarkedlyincreased,ascomparedtothatinyoungandmiddleagerats(P<0.05).ThemRNAlevelsofp21WAF1/CIP1/SDI1wassignificantlyincreasedinmesangialcellsi
7、noldanimals,ascomparedtothatattheageof3and12months,meanwhilethep21WAF1/CIP1/SDI1proteinsexpressionweredramaticallyincreasedwithadvancingage(P<0.05).ConclusionsThecellularphenotypeandfunctionarechangedinratmesangialcellswithadvancingage.Theratmesangialc
8、ellsappearreplicativesenescencewithadvancing11age. 【Keywords】Mesangialcells;Senescence;Phenotype;p21WAF1/CIP1/SDI1 多数学者认为,器官衰老是由于其固有细胞功能减退所导致,肾小球系膜细胞作为肾脏最重要的固有细胞之一,具有调节肾血流量,分泌细胞外基质、炎症介质等功能,其表型和功能的改变在肾脏衰老进程中必然发挥着重要的作用。为了能客观真实地反映肾小球系膜细胞
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