大鼠不同分离纯化方法对胰岛细胞丢失的影响

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1、大鼠不同分离纯化方法对胰岛细胞丢失的影响【摘要】目的探讨提高大鼠胰岛细胞产量和纯度的最佳分离纯化方法。方法40只大鼠分为4组，每组10只。A组：Hanks液灌注+胶原酶V消化+Ficoll400梯度纯化；B组：组织剪碎研磨+筛网过滤；C组：胶原酶V灌注+Ficoll400梯度纯化；D组：胶原酶V灌注+筛网过滤。对用四种不同方法分离纯化的结果进行比较。结果完全随机设计的方差分析显示，A、B、C、D组收获量及纯度比较均有显著性差异(P<0.05)；组间多重比较显示，A组收获量均高于B、D组(P<0.05)

2、，与C组比较差异无统计学意义(P>0.05)；A组纯度与其他组比较均无显著性差异(P>0.05)。结论用胶原酶V或Hanks液灌注，Ficoll400梯度纯化法所收获胰岛细胞的产量和纯度较高，而且价格低廉，是一种较理想的胰岛细胞分离纯化方法。【关键词】胰岛细胞分离纯化大鼠　　ABSTRACT:ObjectiveToexplorethebestmethodofisolatingandpurifyingratisletcellstoimprovetheharvestandpurityofratisletc

3、ells.MethodsFortyratsweredividedintofourgroups,withtenratspergroup.GroupA:RatpancreaseswereperfusedwithHanksanddigestedbycollagensV,isletcellswereisolatedandpurifiedbygradientFicoll400.10GroupB:Pancreaseswerecutandground,thenfilteredwithgrid.GroupC:RatPancrea

4、seswereperfusedwithcollagensV,isletcellswereisolatedandpurifiedbygradientFicoll400.GroupD:RatpancreaseswereperfusedwithcollagensV,butfilteredbygrid.Theharvestandpurityofisletcellsfromfourgroupswerecomparedandanalysed.ResultsThedifferencesintheharvestandpurity

5、ofisletcellsisolatedandpurifiedbythefourmethods(A,B,CandDgroups)weresignificantbycompletelyrandomvarianceanalysis.InterclassmultiplecomparisonmanifestedthattheharvestinAgroupwashigherthanthatinGroupBandD,butnotobviouslydifferentfromthatinGroupC.ThepurityinAgr

6、oupwasnotsignificantlydifferentfromthatinothergroups.ConclusionTheharvestandpurityofisletcellsisolatedthroughHanksperfusionand/orcollagenaseVdigestionwerehigherthanthoseofothermethods.Thecostofthismethodislower,soitsuggeststhatitisabettermethodforisletcelliso

7、lation.　　KEYWORDS:isletcell;isolation;purification;rat10　　1型糖尿病主要因为胰岛细胞迅速被破坏，机体胰岛素分泌不足所致。患者必须长期依赖外源性胰岛素治疗，同时常伴有各种并发症。胰岛移植作为治疗1型糖尿病的方法之一，具有简捷、安全及有效等优点，其临床应用前景可观。然而，胰岛移植手术的效果并不是很理想，一个重要的原因就是可供移植的有功能的胰岛细胞数量不足及胰腺来源困难[13]。近几年来，尽管胰岛分离技术在传统的胆管胶原酶方法的基础上不断改进[4]，但所获得胰

8、岛细胞的数量、活性和纯度仍有较大差异。随着胰岛移植技术的开展，对胰岛分离技术的要求越来越高。本研究拟用不同的方法对大鼠胰岛细胞进行分离和纯化，以寻求一种简便、快捷、廉价、高效的胰岛分离和纯化的方法。　　1材料与方法　　1.1实验动物和主要试剂40只SD大鼠均由西安交通大学医学院实验动物中心提供。小牛血清购自杭州四季青生物制品公司；Ficoll400购自Phamacia公