外源性vegf诱导的大鼠视网膜血管病变

外源性vegf诱导的大鼠视网膜血管病变

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1、外源性VEGF诱导的大鼠视网膜血管病变【摘要】目的:探讨外源性VEGF诱导的大鼠视网膜血管病变的特点。方法:大鼠120只随机分为正常对照组、rrVEGF164低、高浓度组。不同时间行荧光素眼底血管造影、视网膜电图振荡电位、组织学检查。结果:高浓度组注射rrVEGF164眼从注射后10d表现为眼底后极部视网膜动脉局限性高荧光,2wk时表现为单个视网膜内核层毛细血管管腔窄小,内皮细胞肥大,管腔面积和细胞面积分别与自身对照眼、4,6wk比较,差异有显著性(P<0.05)。视网膜电图OPs总波幅2,6wk降低,分别与自身对照眼、4wk比较,差异有显著性(P<0.

2、05)。结论:高浓度高频率注射rrVEGF164诱导的大鼠视网膜血管病变主要表现有视网膜水肿,大血管扩张,内核层毛细血管管腔变窄、接近闭塞,内皮细胞肥大、增生,周边部玻璃体视网膜纤维血管样膜。【关键词】视网膜毛细血管0引言10VEGF是最重要的促血管形成因子,组织缺血、缺氧是VEGF的启动因素。缺血性眼病的视网膜、视网膜下新生血管膜等均有VEGF的表达,眼内VEGF浓度明显升高[1]。目前有关VEGF的研究大多是离体拮抗外源性VEGF或在体拮抗内源性VEGF的药物抑制实验,而单独应用外源性VEGF进行动物实验,探讨VEGF诱导的视网膜血管病变的特点,国内

3、外研究甚少。我们探讨外源性VEGF诱导的视网膜血管病变的特点,为进一步研究药物拮抗VEGF打下基础。1材料和方法1.1材料Sprague-Daweley大鼠(中南大学湘雅二医院动物实验中心提供,雌雄各半,体质量200~240g)120只随机分为3组:正常对照组36只,不作眼内注射。VEGF低浓度组36只,实验眼(右眼)每次注射浓度为10mg/L的rrVEGF1644μL,自身对照眼(左眼)注射等量的0.1mol/LPBS。两眼均为隔天1次,共2次。VEGF高浓度组48只,实验眼每次注射浓度为100mg/L的rrVEGF1644μL,自身对照眼注射等量的0

4、.1mol/LPBS。两眼均为隔天1次,共4次。分别于2,4,6wk时均作眼底检查后各随机选取6只作眼底荧光血管造影、6只作视网膜电图振荡电位检查,再各随机抽取6只处死作组织学切片、6只处死作透射电子显微镜观察。VEGF高浓度组剩余12只于12wk时处死,随机选取各6只行组织学切片、透射电子显微镜检查。Topcon眼底照相机,视觉电生理诊断仪,正方测试格,玻璃毛细管,重组大鼠血管内皮生长因子(rrVEGF164,Sigma公司),FITC-Dextran(Sigma公司)。1.2方法10大鼠充分散瞳后,30g/L戊巴比妥钠溶液(1mL/kg)ip麻醉。结

5、膜囊表面麻醉,眼科手术显微镜下用30#B-D针头于背侧角膜缘后1mm处刺穿眼球壁后立即出针,角膜缘行前房穿刺,消毒剪刀将自制玻璃体腔微量注射针针尖剪去,暴露开口。10μL加样移液器抽取rrVEGF164或PBS4μL注于消毒的点样纸上。自制玻璃体腔微量注射针立即吸取。沿预先穿刺好的针孔处以45~50°的角度进入眼内并缓慢注射,停留约15s后拔针。术眼涂眼膏,术后3d用3g/L诺氟沙星滴眼液滴眼,2次/d。注射rrVEGF164或PBS前、后,出现玻璃体出血者不纳入实验对象。散瞳后,ip麻醉大鼠,结膜囊表面麻醉。暗适应30min,暗红光下安放3个电极,小号

6、银针柄端连接于电极线末端后,角膜电极插于上方周边部角膜基质层,参考电极置于两眼连线的中点皮下,地电极置于同侧耳根皮下,黑色胶纸遮盖未检查眼。根据国际临床视觉电生理学会制定的视觉电生理标准化方案(1994年),设定刺激参数,双眼分别记录视网膜电图振荡电位(electroretinographicoscillatorypotentials,ERG-OPs)。散瞳后眼底荧光血管造影,鼠尾静脉注射50g/LFITC-Dextran1.0mL,固定动物,注射造影剂后5s,各个方位眼底照相,每次拍片间隔5~10s,持续3min,选择性拍片直至注射造影剂50min。剥

7、离视网膜,常规电镜制片,每只大鼠每眼随机观察2个铜网,每个铜网随机照相2张。同一组、同一眼别的样本分散,使各组样本容量达24张。对视网膜内核层单个毛细血管管腔面积、血管内皮细胞面积进行形态计量,采用正方测试格计数法测量视网膜内核层单个毛细血管管腔面积、血管内皮细胞的面积。10统计学处理:所有数据均用均数±标准差(x±s)表示,采用SPSSforWindows11.5统计软件处理。资料正态检验,方差齐性检验后,单因素方差分析,两因素方差分析,P<0.05为统计学差异有显著性。2结果2.1直接眼底镜观察注射rrVEGF164眼低浓度组在注射后1d表现为玻璃体

8、腔轻度混浊,随后逐渐减轻,至3d恢复透明。高浓度组在注射后1d表现玻璃体中度混浊

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