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时间:2018-08-01
《免疫介导的再生障碍性贫血小鼠模型胸腺tbet的表达水平及其意义》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、免疫介导的再生障碍性贫血小鼠模型胸腺Tbet的表达水平及其意义【摘要】目的:探讨再生障碍性贫血(AA)小鼠模型中Tbet蛋白在胸腺的表达水平和意义。方法:建立免疫介导的骨髓衰竭模型,用免疫组织化学方法检测AA胸腺组织石蜡切片中Tbet蛋白表达水平。结果:模型小鼠组胸腺组织石蜡切片中Tbet蛋白表达水平(1.06+0.18)%明显高于正常小鼠组(0.41±0.05)%(P<0.01);模型小鼠组胸腺Tbet蛋白表达与网织红细胞相对值(RC)及中性粒细胞绝对值(ANC)呈负相关(r值分别为-0.679和-0.701,P<0.05),而与血小板数及血红
2、蛋白无明显的线性相关关系。结论:在免疫介导的骨髓衰竭模型小鼠中转录因子Tbet蛋白在胸腺表达增加,说明在AA发病机制中Tbet可能起一定作用。【关键词】再生障碍性贫血小鼠模型胸腺TbetAbstractObjective:TostudytheexpressionandsignificanceofTbetinthymusofImmunemediatedaplasticanemia(AA)mice.Methods:ImmunemediatedAAmiceweredeveloped,expressionofTbetproteininthymusof
3、AAbonemarrowwasmeasuredbyimmunohistochemistry.Results:ExpressionofTbetproteininthymusfromAAmicewere(1.06±0.18)%,thenomaalcontrolswere(0.41±0.05)%,AAgroupwas9significantlyhigherthannormalcontrols(P<0.01),TbetexpressioninthymuswerenegativelycorrelatedwiththeirRCandANC.Conclusion:T
4、rdnscriptionfactorTbetinImmunemediatedaplasticanemiamicewashigh,whichsuggestsTbetmaybeparticipateinhematopoieticfailureofAA.Keywordsaplasticanemia;micenaodel;thymus;transcriptionfactor;Tbet再生障碍性贫血(AA)主要表现为骨髓造血功能低下、全血细胞减少和贫血、出血、感染综合征[1]。其发病机制目前不清楚,众多研究表明,细胞免疫异常是获得性AA发病机制中的主要环节[
5、2]。AA的细胞免疫异常主要表现为Thl淋巴细胞数目增多和功能亢进。Tbet是2000年Szabo等[3]发现了的一种新的在CD4+Th1细胞的分化中起重要作用的属于Tbox家族的转录因子,是Thl细胞特异性转录因子。本文拟通过建立免疫介导的骨髓衰竭小鼠模型,观察模型小鼠的Tbet蛋自在胸腺中的表达水平,以及其与中性粒细胞绝对值(ANC)、网织红细胞相对值、血小板数及血红蛋白的相关关系,了解Tbet蛋白在再障中的表达水平及与再障病情的相关性,为探讨再障的发病机制提供一些思路、线索。1资料与方法91.1实验动物与分组近交系DBA/2小鼠,10周龄,雄
6、性,16~20g,2只,由北京维通利华公司提供。近交系BALB/c小鼠(H2d,MLSb)(H2b,MLSb指小鼠的遗传型),20只,8周龄,雌雄各半,由中国辐射防护研究院提供。将BALB/c小鼠随机分为正常对照组和骨髓衰竭模型组,各10只。1.2试剂与仪器SK1250、MMuLV逆转录酶均购自立陶宛Fermentas公司。SP法试剂盒购于北京中杉金桥生物技术有限公司。Tbet单抗购于SantaCruzBiotechnology。DAB显色剂购于中国医学科学院生物工程研究所。1.3小鼠免疫介导骨髓衰竭模型将DBA/2小鼠(供鼠)颈椎脱臼法处死,常
7、规消毒后,立即在超净工作台中无菌取出胸腺和淋巴结,剪碎,加少量PBS液,轻轻研磨后小筛网过滤,制成单个细胞悬液。台盼蓝鉴定细胞活性,活性细胞在95%以上。细胞计数并配制成所需浓度5×9106/mL备用。AA造模参照目前常用免疫介导再障小鼠模型[4]:BALB/c小鼠,经5.5Gy60Coy射线全身一次性亚致死剂量均匀照射后,4h内经尾静脉输入DBA/2小鼠的胸腺淋巴结混合细胞悬液每只0.2mL,含细胞数为1×106个,建立AA小鼠模型10只。1.4组织化学方法检测胸腺Tbet蛋白表达水平收集正常组和模型组小鼠胸腺,于体积分数为4%的多聚甲醛中固定8h,然
8、后常规石蜡包埋、切片,按照免疫组化学试剂盒说明操作。免疫组织化学S
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