丹参酮ⅱa对人胃癌mkn45细胞增殖及基质金属蛋白酶2表达的影响

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1、丹参酮ⅡA对人胃癌MKN45细胞增殖及基质金属蛋白酶2表达的影响【摘要】目的］通过观察丹参酮ⅡA对人胃癌MKN45细胞的抑制作用及对转移相关基因MMP2表达的影响，探讨其抗肿瘤的机制。［方法］MTT法检测不同浓度丹参酮ⅡA作用下，体外培养的MKN45细胞的增殖情况；RTPCR法、酶谱分析法检测MKN45细胞MMP2mRNA及蛋白的表达。［结果］丹参酮ⅡA各浓度组对肿瘤细胞增殖的抑制率与阴性对照组相比，有显著差异（P<0.05），相关回归分析表明24h、48h、72h的半数抑制浓度分别为42.5μg/ml、19.4

2、μg/ml和7.4μg/ml。PCR半定量分析发现：丹参酮ⅡA各组的MMP2mRNA表达均受到抑制，抑制程度随着药物浓度的增加而增加，酶谱分析法显示：丹参酮ⅡA能降低胃癌MKN45细胞的MMP2蛋白表达，其作用呈剂量效应正相关，与阴性对照组相比，差异有显著性（P<0.05）。［结论］丹参酮ⅡA能有效抑制胃癌MKN45细胞的生长，并具有明显的时间和剂量依赖性。丹参酮ⅡA可能通过抑制胃癌MKN45细胞MMP2mRNA的转录下调MMP2蛋白的表达，进而抑制肿瘤增殖。【关键词】丹参酮ⅡA；胃癌；抑制率；基质金属蛋白酶2

3、　　Abstract：［Objective］TodeterminetheantitumormechanismofTanshinoneⅡAonhumanGastricCarcinomaCellLine10MKN45.［Methods］MKN45cellswereroutinelyculturedinvitro.TheMTTassayhadbeendevelopedforquantitativeevaluationoftheproliferationofMKN45cellsofeachgroup.ExpressionofMMP2

4、mRNAwasmeasuredbyRTPCRandZymography.［Results］Thedifferenceofinhibitionrates（IR）onCellLineMKN45betweenthenegativeandTanⅡAgroupwassignificant（P<0.05）.TheexpressionofMMP2mRNAofTanshinoneⅡAgroups（3,6,9,12μg/ml）waslowerthanthatofthenegativegroup,statisticaldifferencebe

5、tweenthegroupsabovewassignificant（P<0.05）,exceptforthe3μg/mlone.［Conclusions］TanshinoneⅡAinhibitsthegrowthofCellLineMKN45inadoseandtimedependentmanner,whichmayberealizedthroughdownregulatingtheexpressionofMMP2.　　Keywords：TanshinoneⅡA;gastriccarcinoma;inhibitingrat

6、es;matrixmetalloproteinases2　　丹参酮ⅡA是活血化瘀类中药丹参的有效成分之一，具有明显的抗炎、抗氧化、调节免疫的作用，现代医学关于丹参酮抗肿瘤活性的研究相当活跃。本文检测丹参酮ⅡA对人胃癌MKN45细胞增殖及基质金属蛋白酶2表达的影响，从分子生物学角度研究丹参酮ⅡA对胃癌的影响及机制。10　　1材料与方法　　1.1肿瘤细胞株及培养条件人胃癌MKN45细胞在含100u/ml青霉素、100u/ml链霉素、10%胎牛血清的RPMI1640培养液中，37℃、5%CO2条件下培养，取对数生长期细胞进行实验。

7、　　1.2实验试剂及药物丹参酮ⅡA纯品由中国药品生物制品鉴定所生产。引物根据PrimerPremier5.0软件设计，βactin上游引物：5’ATGCCATCCTGCGTCTG3’，下游引物：5’GGACTCATCGTACTCCTGCT3’；MMP2上游引物5’ACCTGGATGCCGTCGTGGAC3’，下游引物：5’TGTGGCAGCACCAGGGCAGC3’。　　1.3实验方法　　1.3.1MTT法指数生长期的MKN45细胞，按每孔1×104密度接种于96孔板，每孔补足RPMI1640培养液至200μl。另设只加培养液的

8、阴性对照孔和阳性对照孔（顺铂2.5μg/ml）。过12h待细胞贴壁良好后，分别加入不同浓度丹参酮ⅡA干预，使终浓度为64μg/ml、32μg/ml、16μg/ml、8μg/ml、4μg/ml。每个浓度设5个复孔。于加药2