临床医学论文-丹参酮ⅡA对人胃癌MKN45细胞增殖及基质金属蛋白酶2表达的影响.doc

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1、临床医学论文■丹参酮IIA对人胃癌MKN45细胞增殖及基质金属蛋白酶2表达的影响【摘要】H的］通过观察丹参酮IIA对人胃癌MKN45细胞的抑制作用及对转移相关基因MMP2表达的影响，探讨其抗肿瘤的机制。［方法］MTT法检测不同浓度丹参酮IIA作用下，体外培养的MKN45细胞的增殖情况；RTPCR法、酶谱分析法检测MKN45细胞MMP2mRNA及蛋白的表达。［结果］丹参酮IIA各浓度组对肿瘤细胞增殖的抑制率与阴性对照组相比，有显着差异（P<0.05）,相关回归分析表明24h、48h、72h的半数抑制浓度分别为42.5u

2、g/mh19.4ug/ml和7.4ug/ml。PCR半定量分析发现：丹参酮IIA各组的MMP2mRNA表达均受到抑制，抑制程度随着药物浓度的增加而增加，酶谱分析法显示：丹参酮11A能降低胃癌MKN45细胞的MMP2蛋白表达，其作用呈剂量效应正相关，与阴性对照组相比，差异有显着性（PvO.05）。［结论］丹参酮IIA能有效抑制胃癌MKN45细胞的生长，并具有明显的吋间和剂量依赖性。丹参酮IIA可能通过抑制胃癌MKN45细胞MMP2mRNA的转录下调MMP2蛋白的表达，进而抑制肿瘤增殖。【关键词】丹参酮IIA；胃癌；抑制

3、率；基质金属蛋白酶2Abstract：［Objective］TodeterminetheantitumormechanismofTanshinoneIIAonhumanGastricCarcinomaCel1LineMKN45.［Methods］MKN45cellswereroutinelyculturedinvitro.TheMTTassayhadbeendevelopedforquantitativeevaluationoftheproliferationofMKN45cellsofeachgroup.Expre

4、ssionofMMP2mRNAwasmeasuredbyRTPCRandZymography.[Results]Thedifferenceofinhibitionrates(IR)onCel1LineMKN45betweenthenegativeandTanIIAgroupwassignificant(P<0.05).TheexpressionofMMP2mRNAofTanshinoneIIAgroups(3,6,9,12ug/ml)was1owerthanthatofthenegativcgroup,statist

5、icaldifferencebetweenthegroupsabovewassignificant(Pv0・05),exceptforthe3ug/mlone・[Conclusions]Tanshinone11AinhibitsthegrowthofCellLineMKN45inadoseandtimedependentmanner,whichmayberealizedthroughdownregulatingtheexpressionofMMP2.Keywords：TanshinoneIIA;gastriccarc

6、inoma;inhibitingrates;matrixmetalloproteinases2丹参酮IIA是活血化瘀类小药丹参的有效成分0—，具有明显的抗炎、抗氧化、调节免疫的作用，现代医学关于丹参酮抗肿瘤活性的研究相半活跃。木文检测丹参酗IIA对人胃癌MKN45细胞增殖及基质金属蛋片酶2表达的影响，从分子生物学角度研究丹参酮IIA对胃癌的影响及机制。1材料与方法1.1肿瘤细胞株及培养条件人胃癌MKN45细胞在含100u/ml青霉素、100u/ml链霉素、10%胎牛血清的RPMI1640培养液中,37°C、5%C02

7、条件下培养，取对数生长期细胞进行实验。1.2实验试剂及药物丹参酮IIA纯品由屮国药品生物制品鉴定所生产。引物根据PrimerPremier5.0软件设计，Pactin±游引物：5‘ATGCCATCCTGCGTCTG3',下游引物：5,GGACTCATCGTACTCCTGCT3?；MMP2上游引物5'ACCTGGATGCCGTCGTGGAC3',下游引物：5'TGTGGCAGCACCAGGGCAGC3'。1.3实验方法1.3.1MTT法指数生长期的MKN45细胞，按每孔1X104密度接种于96孔板，每孔补足RPMI16

8、40培养液至200叮。另设只加培养液的阴性对照孔和阳性对照孔（顺iri2.5ug/ml）o过12h待细胞贴壁良好后，分别加入不同浓度丹参酮IIA干预，使终浓度为64ug/mR32ug/mR16ug/mK8ug/mh4ug/mlo每个浓度设5个复孔。于加药24h、48h、72h后分别取样终止培养，每孔加入5mg/mlMTT溶液20u1,37°C孵