丹参酮ⅡA对人胃癌MKN45细胞增殖及基质金属蛋白酶2表达的影响【临床医学毕业论文范文d.doc

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1、临床医学论文■丹参酮UA对人胃癌MKN45细胞增殖及基质金属蛋白酶2表达的影响【摘要】目的〕通过观察丹参酮UA对人胃癌MKN45细胞的抑制作用及对转移相关基因MMP2表达的影响，探讨其抗肿瘤的机制。〔方法〕MTT法检测不同浓度丹参酮DA作用下，体外培养的MKN45细胞的增殖情况；RTPCR法、酶谱分析法检测MKN45细胞MMP2mRNA及蛋白的表达。〔结果〕丹参酮UA各浓度组对肿瘤细胞增殖的抑制率与阴性对照组相比，有显著差异(P<0.05)，相关回归分析表明24h、48h、72h的半数抑制浓度分别为42.5/zg/ml、19.4/

2、zg/ml和7.4/zg/ml。PCR半定量分析发现：丹参酮UA各组的MMP2mRNA表达均受到抑制，抑制程度随着药物浓度的增加而增加，酶谱分析法显示：丹参酮UA能降低胃癌MKN45细胞的MMP2蛋白表达，其作用呈剂量效应正相关，与阴性对照组相比，差异有显著性(P<0.05)。〔结论〕丹参酮HA能有效抑制胃癌MKN45细胞的生长，并具有明显的吋间和剂量依赖性。丹参酮HA可能通过抑制胃癌MKN45细胞MMP2mRNA的转录下调MMP2蛋白的表达，进而抑制肿瘤增殖。【关键词】丹参酮UA；胃癌；抑制率；基质金属蛋白酶2Abstract:

3、〔Objective〕TodeterminetheantitumormechanismofTanshinoneIIAonhumanGastricCarcinomaCellLineMKN45.〔Methods〕MKN45cellswereroutinelyculturedinvitro.TheMTTassayhadbeendevelopedforquantitativeevaluationoftheproliferationofMKN45cellsofeachgroup.ExpressionofMMP2mRNAwasmeasured

4、byRTPCRandZymography.〔Results〕Thedifferenceofinhibitionrates(IR)onCel1LineMKN45betweenthenegativeandTanIIAgroupwassignificant(P<0.05).TheexpressionofMMP2mRNAofTanshinoneIIAgroups(3,6,9,12/zg/ml)was1owerthanthatofthenegativegroup,statisticaldifferencebetweenthegroupsab

5、ovewassignificant(Pv0・05),exceptforthe3[ig/mlone・〔Conclusions〕TanshinoneDAinhibitsthegrowthofCellLineMKN45inadoseandtimedependentmanner,whichmayberealizedthroughdownregulatingtheexpressionofMMP2.Keywords:TanshinoneIIA;gastriccarcinoma;inhibitingrates;matrixmetalloprot

6、einases2丹参酮UA是活血化瘀类中药丹参的有效成分之一，具有明显的抗炎、抗氧化、调节免疫的作用，现代医学关于丹参酮抗肿瘤活性的硏究相当活跃。本文检测丹参酮UA对人胃癌MKN45细胞增殖及基质金属蛋白酶2表达的影响，从分子生物学角度硏究丹参酮UA对胃癌的影响及机制。1材料与方法1.1肿瘤细胞株及培养条件人胃癌MKN45细胞在含lOOu/ml青霉素、100u/ml链霉素、10%胎牛血清的RPMI1640培养液中，37°C、5%C02条件下培养，取对数生长期细胞进行实验。1.2实验试剂及药物丹参酮nA纯品由中国药品生物制品鉴定所生

7、产。引物根据PrimerPremier5.0软件设计，/3aclin±游引物：5'ATGCCATCCTGCGTCTG3，，下游引物：5'GGACTCATCGTACTCCTGCT3'；MMP2上游引物5'ACCTGGATGCCGTCGTGGAC3'，下游引物：5'TGTGGCAGCACCAGGGCAGC3'。1.3实验方法1.3.1MTT法指数生长期的MKN45细胞,按每孔1x104密度接种于96孔板，每孔补足RPMI1640培养液至200另设只加培养液的阴性对照孔和阳性对照孔（顺钳2.5/zg/ml）。过12h待细胞贴壁良好后，分

8、别加入不同浓度丹参酮UA干预，使终浓度为64/zg/ml'32/zg/ml、16/zg/ml'8/zg/ml'4/zg/ml°每个浓度设5个复孔。于加药24h、48h、72h后分别取样终止培养，每孔加入5mg/mlMTT溶液20“137°C孵育4h