伴高血压2型糖尿病大鼠模型的建立

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1、伴高血压2型糖尿病大鼠模型的建立作者：孙兆峰王利张玲李大伟夏作理【摘要】目的制备与人类发病过程类似的伴高血压2型糖尿病大鼠模型。方法选择40只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为对照组12只和实验组28只，对照组以标准大鼠饲料饲喂，实验组以高脂高盐饲料喂养，两组均饮用大鼠专用去离子水，16w进行正糖钳实验，确定胰岛素抵抗，腹腔注射链脲佐菌素(STZ)造成2型糖尿病。实验过程中每周测食量、水量和体重，每4w测血糖和尾动脉血压，实验16w时取血测空腹血浆胰岛素。结果饲喂高脂高盐饲料16w后，与对照组相比，实验组尾动脉血压明显升高，差异显著（P＜0.01）；实验组空腹胰

2、岛素浓度明显高于对照组（P＜0.01）；与对照组相比，实验组葡萄糖输注速率明显降低，两组差异有统计学意义；STZ注射后实验组血糖明显升高，达到了糖尿病的诊断标准。结论高脂高盐饮食配合STZ腹腔注射可成功诱导出伴高血压2型糖尿病大鼠模型。【关键词】2型糖尿病；高血压；高脂肪高盐饮食；高胰岛素正常血糖钳夹实验9高血压是糖尿病患者极为常见的共患病，总体上糖尿病伴高血压的患病率约在20%～50%左右。以往研究多集中于单纯2型糖尿病或单纯高血压，对2型糖尿病合并高血压的实验研究相对较少，而后者的实验结论往往对临床则有更高的指导意义。长期食用以脂肪为代表的高热量饮食可导致胰

3、岛素抵抗(IR)，而高盐饮食则和高血压的发生有关，新近已有学者〔1，2〕采用不同配比的高脂高盐饲料喂养建立代谢综合征(MS)大鼠模型。本研究旨在以高脂肪高盐饮食诱导配合链脲佐菌素(STZ)腹腔注射建立一种伴高血压的2型糖尿病大鼠模型。　　1材料与方法　　1.1实验动物选用SPF级雄性Wistar大鼠40只，体质量（140±20）g，购于山东中医药大学实验动物中心，合格证号：SCXK(鲁)20050015。动物饲养于半透明IVC盒内，自由饮食进水，明暗周期12h，单笼饲养。动物房温度22～26℃，湿度55%～65%。适应性饲养7d后，用随机数字法将大鼠分为对照组12

4、只和实验组28只。实验组于注射STZ后第3天和第5天各死亡1只。　　1.2实验材料和主要仪器STZ和戊巴比妥钠购于Sigma公司，肝素和中性胰岛素购于江苏万邦生化医药公司，罗康全血糖仪及试纸购于美国罗氏公司，胰岛素放免试剂盒购自中国原子能科学研究院同位素研究所。微量注射泵购于浙江大学医学仪器公司，ALCNIBP无创血压测定分析系统由上海澳尔科特生物技术公司生产。　　1.3方法9　　1.3.1造模饲料实验大鼠标准饲料购于山东中医药大学实验动物中心。造模饲料由质量比占75%标准饲料加食用化猪油20%和氯化钠5%加工而成。　　1.3.2模型制备实验大鼠适应性饲养7d后

5、，对照组继续以标准大鼠饲料喂养，实验组则以高脂饲料取代标准大鼠饲料喂养，两组均饮用大鼠专用纯净水，喂养16w后，两组各取6只大鼠进行正糖钳实验，确定发生IR后，实验组给予STZ20mg/kg腹腔注射，对照组予相同体积枸橼酸缓冲液（pH=7.4）。　　1.3.3正常血糖钳夹实验采用罗谋伦〔3〕等的方法稍加改良，禁食不禁水大鼠12h后，称重，以1%戊巴比妥钠（40mg/kg）腹腔注射麻醉。大鼠仰位固定于大鼠手术台上，保持体温在37.5℃左右，用0.03mm硅化胶管进行双侧颈静脉和左侧颈动脉插管，管腔中预先注入200IU/ml的肝素生理盐水抗凝。双侧静脉导管分别连接微量

6、注射泵的两个针筒座上，用以分别输注葡萄糖和胰岛素，左颈动脉导管用以取血测血糖。待输注装置安装完毕后，首先经左颈动脉导管取血0.5ml用于基础血糖值和基础血浆胰岛素测定，从右外颈静脉插管按1ml/kg体重注射入1000IU/ml肝素生理盐水溶液使血液抗凝，然后封住插管的出口，以免静脉血流出。然后从右颈静脉恒速输注胰岛素，速率为4mU·kg-1·min-1，当血糖值从基础值下降达到0.59mmol/L时，开始从左颈静脉输注10%葡萄糖溶液，每5min测一次血糖，根据所测血糖值不断调整葡萄糖输注速率(GIR)，连续30min血糖值稳定在基础血糖值±0.5mmol/L范围

7、内，称之为“钳夹形成”，记录稳态下连续60min的GIR。取稳态下6次GIR的平均值。　　1.3.4尾动脉血压测定使用ALCNIBP无创血压测定分析系统，预热仪器，把大鼠用固定盒固定，露出尾巴安装并调整好压力感受器，放入恒温箱中30min，待大鼠安静且脉搏波形稳定后开始测量，每只记录6次，去掉最高和最低值，取其平均作为此次的血压值。　　1.3.5生化及一般指标检测每周测1次食量、饮水量和体重。每4周同一时间点剪尾尖取血测血糖，采用葡萄糖氧化酶法，以血糖≥13mmol/L诊断为糖尿病。正糖钳实验同时颈动脉取血0.5ml，肝素抗凝，4℃恒温3000r/min离心，取

8、血浆采用放