大肠菌群检测作业标准书ok

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1、文件名称大肠菌群检测作业标准书页次1/4文件编号YSMD/ZJ/ZY-01版次A/01.目的：为保证原、辅料以及产品中的微生物指标之大肠菌群符合公司生产、客户以及国家的标准，确保产品不会对消费者健康造成影响；特制定本标准书。2.范围本标准书适用于对原、辅料以及半成品、成品的大肠菌群的检验3.权责检验员负责实验的全过程的操作4.术语大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。食品中大肠菌群数系以100mL(g)检样内大肠

2、菌群最可能数(MPN)表示。5.操作方法5.1仪器：5.1.1冰箱：0℃-4℃5.1.2恒温培养箱：36℃±1℃5.1.3架盘药物天平：0g—500g,精确至0.5g5.1.4显微镜：10×---100×5.1.5灭菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）5.1.6灭菌锥形瓶：500mL5.1.7灭菌培养皿：直径90mm5.1.8灭菌试管：16mm×160mm5.1.9灭菌刀、剪子、镊子、载玻片、酒精灯、试管架等。5.2药品5.2.1乳糖胆盐发酵管：按GB4789.28-2003中4.9规定。文件名称大肠菌群检测作业标准书页次

3、2/4文件编号YSMD/ZJ/ZY-01版次A/05.2.2伊红美蓝琼脂平板：按GB4789.28-2003中4.25沥规定。5.2.3乳糖发酵管：按GB4789.28-2003中4.10规定。5.2.4EC肉汤：按GB4789.28-2003中4.11规定。5.2.5磷酸盐缓冲稀释液：按GB4789.28-2003中3.22规定。5.2.60.85%生理盐水。5.2.7革兰氏染色液：按GB4789.28-2003中2.2规定。5.3检验程序大肠菌群检验程序如下：检样稀释乳糖胆盐发酵管36±1℃，24±2h不产气产气大肠菌群阴性伊红美蓝琼脂平板36±1

4、℃，18-24h报告革兰氏染色乳糖发酵管36±1℃，24±2h革兰氏阳性革兰氏阴性无芽孢杆菌产气不产气大肠菌群阴性大肠菌群阴性报告大肠菌群阳性5.4操作步骤文件名称大肠菌群检测作业标准书页次3/4文件编号YSMD/ZJ/ZY-01版次A/05.4.1检样稀释5.4.1.1以无菌操作将检样25mL(或g)放于含有225mL灭菌生理盐水灭菌玻璃瓶内，经充分振摇或研磨做成1∶10的均匀稀释液。固体检样最好用均质器，以8000～10000r/min的速度处理1min，做成1∶10的均匀稀释液。5.4.1.2用1mL灭菌吸管吸取1∶10稀释液1mL，注入含有9m

5、L灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混匀，做成1∶100的稀释液。5.4.1.3另取1mL灭菌吸管，按上条操作依次做10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支1mL灭菌吸管。5.4.1.4根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种3管。5.4.2乳糖发酵试验将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1mL以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，1mL及1mL以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管，置36±1℃温箱内，培养24±2h，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，则按下列程序进行

6、。5.4.3分离培养将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36±1℃温箱内，培养18～24h，然后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实试验。5.4.4证实试验在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1～2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36±1℃温箱内培养24±2h，观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。5.4.5报告根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100mL(g)大肠菌群的MPN值。5.5粪大肠菌群(faecalcoliform)5.5.1用接种环将所有产气的乳糖胆盐发酵管

7、培养物(见7.2条)转种于EC肉汤管内，置44.5±0.2℃水浴箱内(水浴箱内的水面应高于EC肉汤液面)，培养24±2h，经培养后，如所有EC肉汤管均不产气，则可报告为阴性；如有产气者，则将所有产气的EC肉汤管分别转种于伊红美蓝琼脂平板上，置36±1℃培养18～24h，凡文件名称大肠菌群检测作业标准书页次4/4文件编号YSMD/ZJ/ZY-01版次A/0平板上有典型菌落者，则证实为粪大肠菌群阳性。根据证实为粪大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表，报告每100mL(g)粪大肠菌群的MPN值，5.5.2结果报告表1大肠菌群最可能数(MPN)检索表5.6检验过

8、程严格按照进行无菌操作，并注意安全5.7实验结束后作好实验室的卫生清洁以及及时、准确的填写相应