水质大肠菌群检验作业指导书

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1、水质大肠菌群检验作业指导书1目的规定原水、砂滤后水、碳滤后水、精滤后水、工艺水、溶糖车间工艺水、调配车间工艺水的总大肠菌群的检验方法，保证按标准化操作。2适用范围水质的总大肠菌群检测。3术语无4职责微生物检测员负责按作业指导书进行检验。5工作流程图见附件6内容及要求6.1设备和材料6.1.1生化培养箱:36°C±1°C6.1.2电热恒温培养箱:44.5°C+0.5°C6.1.3冰箱：0°C〜4°C6.1.4净化工作台6.1.5显微镜：10X〜100X6.1.6电子秤6.1.7无菌三角瓶：250mL和500mL6.1.8无菌试管：1

2、8X200mm6.1.9无菌刻度吸管：1讥(具O.OlmL刻度)和10讥(具0.1讥刻度)6.1.10酒精灯6.1.11紫外线杀菌灯6.2培养基和试剂6.2.1乳糖胆盐发酵培养基(或乳糖蛋白月东培养基)6.2.2乳糖发酵培养基6.2.3伊红美蓝琼脂(EMB)6.2.4EC培养基6.2.5EC-MLG培养基6.2.6革兰氏染色液6.2.7生理盐水(0.85%)6.2.8乙醇溶液(75%)6.3操作步骤6.3.1总大肠菌群的检测（按5管法操作）6.3.1.1初发酵试验取待检样品10mL,接种于含10mL双料的乳糖胆盐发酵管内，共接种5

3、管；对于可能存在污染的水源，取待检样品10mL.1汕、lmL（取样品lmL于9mL生理盐水中稀释），分别接种于含10mL双料、单料和单料乳糖胆盐发酵管内，各接种5管。置36€土「C生化培养箱内培养24h±2h,如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为总大肠菌群阴性，如有产气者，则按下列程序进行。6.3.1.2分离培养将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36°C土1°C生化培养箱内，培养18h-24h,取出。6.3.1.3证实试验用接种环挑取疑似总大肠菌群菌落（菌落呈黑紫色，表而有金属光泽），接种于乳糖发酵管内，置36°C

4、土1°C生化培养箱内培养24h土2h,同时对上述可疑菌落进行革兰氏染色、镜检。凡乳糖发酵管产气、革兰氏染色为阴性无芽胞杆菌，报告为总大肠菌群阳性。6.3.1.4报告根据证实为总大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100讥样品中总大肠菌群的最可能数（MPN）值。15管法结果见表1；5管法见表2。总大肠菌群MPN检索表（表1）（总接种量55.5mL,其中5份lOmL水样，5份lmL水样，5份0.1inL水样）接种量（mL）总大肠菌群/（MPN/100mL）接种量（mL）总大肠菌群/（MPN/lOOmL）10X51X50.1X51

5、0X51X50.1X5000<21002001210140024102600351038004710410接种量(mL)总大肠菌群/(MPN/100mL)接种量(mL)总大肠菌群/(MPN/100mL)10X51X50.1X510X51X50.1X500591051201021104011■11116012611280137113100149114120151111514020412060216121802271221002391231202•11112415025131251703061308031713110032913212

6、03311133150341313417035151351904081401104191411304211142150431314317接种量(mL)总大肠菌群/(MPN/100mL)接种量(mL)总大肠菌群/(MPN/lOOmL)10X51X50.1X510X51X50.1X504415144190451714522050915013051111511505213152170531515319054171542205519155242005300820173011120293021320312303162041430420205

7、1630523210731011211931114212123121721314313202141731423215193152722093201422112321172221432220223173232422419324272252232531接种量(mL)总大肠菌群/(MPN/lOOmL)接种量(inL)总大肠菌群/(MPN/100mL)10X51X50.1X510X51X50.1X523012330172311433121232173322423320333282342233432235253353624015340212

8、4117341242422034228243233433224425344362452834540250173502525120351292522335232253263533725429354412553235545400135002340117