puma在大鼠胰腺移植缺血再灌注损伤中的意义

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1、PUMA在大鼠胰腺移植缺血再灌注损伤中的意义作者：吴娅娜,张克君,崔海宁,王正文,明松林【摘要】目的：探讨PUMA在移植胰腺缺血再灌注损伤(I/RI)中的早期促凋亡作用。方法：对封闭群大鼠建立大鼠腔静脉内分泌引流、肠道外分泌引流的动物模型.再灌注后第0、1、2、3、4、6、9、12h等时点,每时点处死5只大鼠,切取移植胰腺,石蜡包埋切片,原位DNA缺口末端标记(TUNEL)法测定胰腺组织细胞凋亡,Westernblot方法测定移植胰腺组织PUMA,bcl2、bax、caspase3蛋白表达。

2、结果：再灌注术后第0、1、2、3、4、6、9、12h,胰腺细胞凋亡数分别为(29.42±4.93)、(47.65±6.43)、(74.80±9.73)、(106.35±16.80)、(148.71±19.50)、(123.96±15.54)、(97.32±10.60)和(57.42±9.56)个/高倍视野。各时点均显著高于正常胰腺(23.48±4.26)。第4小时细胞凋亡数明显增高,12h降低到最低值,不同组细胞凋亡数的差异有统计学意义(P<0.01);PUMA以及其下游的bax和caspa

3、se8蛋白表达在第4小时达到最高峰,12h降低到最高值,bcl2在第4小时达到最低值,蛋白表达差异均有统计学意义(P<0.05),以后逐渐升高,12h降低到最低值,PUMA表达与各时点的细胞凋亡数有明显的正相关(r=1.00,P<0.05)。结论：I/RI后细胞早期凋亡与PUMA活化有关,PUMA是通过调节下游bax、caspase8、bcl2基因发挥凋亡促进作用。8【关键词】胰腺移植;缺血再灌注损伤;凋亡;PUMA蛋白;大鼠　　[ABSTRACT]Objective:Tost

4、udytheproapoptosiseffectofP53upregulatedmodulatorofapoptosis(PUMA)proteinonischemiareperfusioninjuryofratsstimulatedduringpancreatictransplantation.Methods:Ratmodelsofpancreatictransplantationwithvenacavadrainageandentericdrainagewereestablishedfir

5、stly.Then5animalsineachgroupweresacrificedrespectivelyatdifferenttimepointsincluding0,1,2,3,4,6,9and12hafterreperfusion,withpancreaticgraftsbeingremovedforapoptosicanalysisbyusingDNAnickendlabelingtechniqueandproteinexpressionanalysisofPUMA,bcl2,baxa

6、ndcaspase3byusingwesternblotmethod.Results:Underhighpowerfield,thenumbersofapoptosiccellsinpancreaticgraftsateachtimepointwas29.42±4.93,47.65±6.43,74.8±9.73,106.35±16.8,148.71±19.50,123.96±15.54,97.32±10.6and57.42±9.56,respectivelywhichareallsignific

7、antlyhigherthanthenumberinnormalpancreatictissues(23.48±4.26).Itindicatedthenumberswereobviouslyincreasedat4hafterprofusionwhiledecreasedtotheminimumat12hwithsignificantdifferenceamongeachgroup(P<0.01).8TheexpressionofPUMA,baxandcaspase3allstarted

8、toupregulatedat1hafterprofusionandincreasedtomaximumat4h,thengraduallydecreasedtominimumat12h.Whileforbcl2,theexpressionstartedtodownregulatedat1hafterprofusionanddecreasedtotheminimumat4h,thengraduallyincreasedtomaximumat12h.Therearesignif