hplc法测定丹参超临界萃取物中丹参酮ⅱa的含量

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1、HPLC法测定丹参超临界萃取物中丹参酮ⅡA的含量【关键词】,高效液相色谱法［摘要］目的：建立超临界流体萃取(supercriticalfluidextraction，简称SFE)技术和高效液相色谱(HPLC)技术联用测定丹参中主要成分丹参酮ⅡA含量的方法。方法：探讨改性剂、温度、压力等条件对回收率的影响，确定SFECＯ2萃取丹参中丹参酮ⅡA的最佳条件；并采用HPLC法对萃取成分中丹参酮ⅡA进行定量分析，确定最佳的色谱分析条件。结果：用超临界流体萃取丹参的最佳萃取条件为：萃取压力30MPa，萃取温度45℃；分离釜I压力16MPa，温度40℃；分离釜Ⅱ压力8MPa，温度33℃；CO2流量

2、为3．3L/h：萃取时间6h；改性剂用丙酮，流速为0．3L/h。最佳色谱条件：ODSC18色谱柱(4．6mm×250mm)，流动相为甲醇水(V∶V=75∶25)，紫外检测波长270nm，流速1．0ml/min。丹参酮ⅡA浓度在23．36μg/ml～116．80μg/ml范围内，峰面积与进样量线性关系良好，平均回收率为99．12％，RSD=1．99％。结论：用SFEHPLC联用提取测定丹参中主要成分丹参酮ⅡA回收率高、方法快速简便、结果准确、灵敏度高、重现性好。　　［关键词］高效液相色谱法；超临界流体萃取；丹参；丹参酮ⅡA9　　丹参是我国传统使用的中药，具有祛瘀止痛、活血通经、清新除烦

3、之功效，能抑制血小板黏附、聚集和释放，扩张血管和改善微循环，近年来还证实具有抗氧化和钙拮抗作用［1］。药理研究表明，丹参主要有效成分包括丹参素、丹参酮、原儿茶醛。其主要化学成分之一丹参酮ⅡA有明显的抗炎作用，并广泛应用于冠心病的治疗［2］，近年来还被应用于肿瘤的治疗［3］。《中华人民共和国药典》(2000年版)以丹参酮ⅡA作为标定丹参的主要成分［4］。超临界CO2流体萃取(简称SFECO2萃取)技术是近20年来发展起来的在分离领域出现的一种新技术［5］。它与常规溶剂萃取的区别是选用一种称为超临界流体(SF)的物质代替有机溶剂作为萃取剂。它是利用在临界点附近，体系温度和压力的微小变化可

4、导致物质溶解度发生几个数量级的突变的特性实现物质的分离。该法具有无毒、快速、廉价、低温操作等优点。本实验采用HPLC法对丹参超临界萃取物中丹参酮ⅡA的含量进行定量测定。　　1材料与方法　　1．1实验仪器SFE-1型超临界萃取器(大连八达空间科学应用技术研究所)，本系统由萃取釜、分离釜Ⅰ、分离釜Ⅱ、制冷机、高压泵和净化器6部分组成。日本岛津LC-10AD型高效液相色谱仪，77251进样阀(Rheodyne9USA，附20μl定量环管)，SPD-10A紫外可变波长检测器(JAPAN)，ODS-C18色谱柱(4．6mm×250mm)；江申色谱工作站；V-560紫外分光光度计(JASCO日本

5、分光株式会社)；TG328A型分析天平(上海天平仪器厂)，SK-1快速混匀器；CQ250超声波清洗器(上海超声波仪器厂)，真空泵(天津)、针筒式油膜过滤器(0．45μm)(大连伊利特科学仪器有限公司)。　　1．2药材与试剂丹参(安徽毫州，批号021112)；丹参酮ⅡA标准品(中国药品生物制品鉴定所)；CO2(大连化学物理研究所)；甲醇为色谱纯(天津市科密欧化学试剂开发中心)；丙酮为分析纯；水为去离子水。　　1．3超临界流体萃取过程将丹参的根茎切粒后投入萃取釜中，按设定的萃取路线：CO2钢瓶―冷冻系统―高压泵―萃取釜―分离釜I―分离釜Ⅱ―净化器―CO2贮罐(循环用)。分别对萃取釜、分离

6、釜I、分离釜Ⅱ进行加热，当温度分别达到45℃、40℃、33℃时，通过高压泵对萃取釜、两个分离釜进行加压，当压力分别达到30MPa、16MPa、8MPa时，开始循环萃取，并保持恒温恒压，CO2流速3．3L/h。萃取分离时每隔一定时间放出萃取产物。图1：SFECO2流程示意图（略）　　1．4色谱条件ODSC18柱(4．6mm×250mm)，流动相为甲醇∶9水(V∶V=75∶25)，紫外检测波长270nm，流速1．0ml/min，温度为室温，进样量为20μl。　　1．5标准溶液的配制丹参酮ⅡA标准品至干燥器中干燥24h，精密称取14．64mg，置25ml棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，再

7、配制成每毫升含23．36μg，46．72μg，70．08μg，93．44μg，116．80μg，140．16μg的标准品甲醇溶液，放入冰箱冷藏室保存。　　1．6标准曲线的制备在上述色谱条件下进样测定，记录丹参酮ⅡA的色谱图，见图1（略）。每个实验点重复进样3次，分别记录峰面积，计算峰面积平均值(Y)，结果见表1。以丹参酮ⅡA标准品的峰面积均值(Y)对其浓度(X)作图，绘制标准曲线，见图2。对其进行线性回归得回归方程为：Y=5．27×105X-1．31×10