【医学超级全之病生机能实验】实验七、dic

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1、实验七弥散性血管内凝血一、目的1.学习DIC动物模型复制方法；2.学习血液学指标（PT、KPTT）的测定；了解急性DIC的诊断标准和实验室检查方法3.讨论DIC的发病机制；锻炼动手操作能力二、器材、药品手术器械、托盘天平、离心机、水浴箱、试管、移液枪、秒表1.5%戊巴比妥钠、4%兔脑粉、P试液、K试液、3.8%枸橼酸钠0.025mol/LCaCl2溶液三、方法、步骤1.称重→麻醉（1.5%戊巴比妥钠，2mL/kg）→分离颈总动脉→插入插管→取血于抗凝管中至4mL，混匀。2.头皮针扎入耳缘静脉，注射4%兔脑粉稀释液30mL，①1mL/min×5min注

2、射方式与速度为：②2mL/min×5min③3mL/min×5min注射结束后，立即取血至4mL，混匀。3.间隔30min后，再次取血至4mL，混匀。4.取血样本平衡后，以2500rpm离心10min，取上清液测定PT、KPTT。血1血2血30.4ml3.8%枸橼酸钠4ml①1①2①3A远心端近心端活结组别管号5.PT测定：37℃水浴1min取0.1mL血浆加入P试剂0.2mL，开始计时，侧动试管，直至液体停止流动（呈胶冻状）或出现白色粗颗粒时，即为凝固终点→计时停止，记录凝血时间。6.KPTT测定：37℃水浴2min取0.2mL血浆，加K试剂0.2

3、mL加入CaCl20.2mL，观察方法同上，记录凝血时间。四、实验结果表一静脉注射兔脑粉对家兔血液学指标的影响组别PT(S)KPTT(S)注射前第4组第6组注射后第2组第1组注射后30min第3组第5组血清：血液凝固之后的淡黄色液体。血浆：血液抗凝后，除去血细胞后的淡黄色液体。区别：血浆存在凝血因子，而血清没有。五、分析讨论1、在家兔实验性DIC实验中，影响实验成败的最重要因素是什么？2、家兔实验性DIC的致病原因是什么？3、PT、KPTT测定的原理是什么？4、在实验性DIC实验中，PT和KPTT明显延长的原因是什么？六、注意事项1.戊巴比妥钠毒性大

4、，勿麻醉过量；2.动脉插管固定线，打活结，以便解开；3.放血速度中等，不宜过快或过慢；量要把握好，不宜过多或过少；4.取血后，立即以大拇指堵住管口，颠倒混匀6-7次；5.每次取血后，立即更换插管，并及时清洗换下的插管；6.抗凝管每次取一支，用到哪支取哪支，禁止全部拿到实验台；7.插管及其他器械均要洗净、擦干、回收，家兔处死。8.三根插管、动脉夹、眼科镊放入小塑料杯中。（1）凝血酶原时间（prothrombintime，PT）测定原理：0.1mL血浆(水浴1min)，加P试剂0.2mL，开始计时。（P试液：兔脑粉+Ca2+）PT是外在凝血途径的筛选试验

5、。DIC时因因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ和Ⅹ等均减少，故PT延长。正常12秒，超过正常对照3秒或呈动态变化以上有意义。它反映肝脏合成功能、储备功能、病变严重程度及预后的一个非常重要的指标。（2）白陶土部分凝血活酶时间（KPTT）测定原理：0.2mL血浆，加K试剂0.2mL(水浴2min)，加CaCl20.2mL。（K试液：白陶土+磷脂，其中白陶土可以硅藻土、鞣花酸代替）KPTT是内在凝血途径的筛选试验。除因子Ⅶ和XIII外，任何一个凝血因子缺乏都可使KPTT延长。正常35~45秒，超过正常对照10秒以上有意义。DIC的高凝期KPTT缩短，在消耗性低凝血期KPT

6、T延长。