高效液相色谱-串联质谱法测定有机肥抗生素残留

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2、精选公文范文管理资料高效液相色谱-串联质谱法测定有机肥抗生素残留[键入文字][键入文字][键入文字]精选公文范文管理资料　　近年来，随着养殖业的快速发展，抗生素被广泛用作畜禽饲料添加剂，用于预防和治疗畜禽疾病，促进畜禽生长。由于抗生素被盲目地过量使用，对环境造成了大量的污染。研究表明，动物体内的抗生素以母体或代谢物的形式随尿或粪便排出体外的量，约占用药量的40%～90%［1－3］。以畜禽粪便为主要肥料的有机肥因含有丰富的有机质及氮、磷元素广泛用于农业生产。对农田土壤、地表和地下水及生态系统中各类

3、生物产生危害，并诱发和传播各类抗生素耐药细菌，威胁着人类的健康与生存环境［4－8］。　　分属于青霉素类的青霉素G和普鲁卡因青霉素，分属于磺胺类的磺胺嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺噻唑，以及分属于四环素类的土霉素、四环素、金霉素和强力霉素是养殖业常用的抗生素类药物［9，10］。研究多关注的是这些药物在地表水或地下水体系，水产品及动物组织中的残留［11－13］，但对有机肥料中青霉素类、磺胺类和四环素类药物的残留研究却未见报道。因此建立同时测定有机肥料中3类抗生素的方法亟待解决，对我国主要商品有机肥及有机

4、肥原料鸡粪、猪粪、污泥等中抗生素类污染的种类和含量筛查和检测起到一定的积极作用。　　目前，抗生素残留检测主要的方法有:微生物抑制法、酶联免疫方法、液相色谱法、液相色谱与质谱联用法［14－22］。微生物抑制法和酶联免疫方法属于筛选方法，操作简便、快速，成本低，但是微生物抑制法检测时间较长，易受到其他抗生素的干扰，常缺乏专一性和精确度，酶联免疫方法存在一定的假阳性，需要其他方法进行确认［12］。液相色谱法是较常用的方法，具有分离效果好，测定精度高的优点，但前处理比较复杂。随着质谱技术的发展，液相色谱

5、－质谱联用法正越来越广泛地应用于抗生素残留的分析中，其分析范围广，背景干扰少，灵敏度高，结果精确可靠，将是抗生素残留检测的首选方法。因此本研究采用高效液相色谱－串联质谱法(HPLC－MS/MS)同时测定了有机肥料中青霉素G、普鲁卡因青霉素，磺胺嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺噻唑，土霉素、四环素、金霉素和强力霉素。到目前为止，国内尚未见高效液相色谱－串联质谱联用同时测定以上抗生素残留的报道。　　1材料与方法　　1.1仪器与试剂　　仪器:Agilent1200高效液相色谱－API2000三重四极杆串联质

6、谱联用仪，配备电喷雾(ESI)离子源;Biofugestratos离心机;Votex2涡旋仪;固相萃取装置;StrataSDB－L固相萃取小柱。TTL－DCII型氮吹仪，KQ－300DE型超声仪，THZ－D型振荡仪。　　试剂:甲酸、乙腈、乙酸乙酯均为色谱纯，购自美国Fisher公司;柠檬酸、磷酸氢二钠等其他试剂均为分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司;试验用水均为超纯水;Na2EDTA－McIlvaine缓冲液(0.1mol/L，pH=4.0)。　　选择3种较常用的磺胺类药物:磺胺嘧啶、磺胺二甲

7、基嘧啶、磺胺噻唑;选用4种四环素类抗生素:土霉素、四环素、金霉素、强力霉素;青霉素类抗生素:选用青霉素G和普鲁卡因青霉素。上述药物均购自Dr.EhrenstorferGmbH公司，纯度均不低于96.0%。　　1.2标准溶液和缓冲液的配制　　标准溶液:分别精确称取各种标准抗生素10mg(精确到0.0001g)于10mL容量瓶中，用甲醇溶解，即得到浓度为1000mg/L的标准贮备液，4℃[键入文字][键入文字][键入文字]精选公文范文管理资料冰箱内保存。标准工作溶液用超纯水稀释贮备液，现配现用。　　

8、Na2EDTA－McIlvaine缓冲液(0.1mol/L，pH=4.0):将21.01g柠檬酸，44.78gNa2HPO4·12H2O和60.5gNa2EDTA·2H2O溶于1.625L水中。　　1.3实验方法　　1.3.1样品提取与净化　　将有机肥料样品混匀，称取1.0g样品于50mL离心管中，加入2×15mL(2次提取，每次15mL)pH=4.0的Na2EDTA－McIlvaine缓冲溶液，涡旋混匀，超声10min后再振荡提取10min，10000r/min高速离心10min，上清水层直接