HPLC法测定万寿菊茎中叶黄素的含量.doc

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1、HPLC法测定万寿菊茎中叶黄素的含量作者:曹洪昭聂传平李红玉【摘要】目的:建立一种测定万寿菊茎中叶黄素含量的HPLC方法。方法:采用DiamonsilC18色谱柱(200mm×4.6mm,5μm),流动相:甲醇∶水=97.5∶2.5,流速:1.0mL/min,检测波长:445nm。结果:叶黄素在1.92~96μg/mL范围内,有良好的线性关系(r=0.9996),平均回收率为98.9%,RSD1.04%。结论:该法简便准确、重现性好,可用于万寿菊茎中叶黄素的含量测定。【关键词】万寿菊茎;叶黄素;高

2、效液相色谱;含量测定叶黄素(lutein)是胡萝卜素的衍生物,是一种优良的抗氧化剂,在老年性黄斑退化病和白内障疾病防治方面具有重要的作用[1,2]。此外,叶黄素还具有预防心血管疾病、抗癌和提高机体免疫力等功能[3]。1g叶黄素的价格与1g黄金的价格相同,因此又名“植物黄金”。目前叶黄素主要从万寿菊干花中提取、检测,而对万寿菊茎中叶黄素含量的测定研究未见报道。我国在新疆、内蒙古、黑龙江等地区建立了大面积的万寿菊种植基地,但是大量的万寿菊茎、叶被作为废弃物而未被利用。因此,研究、开发富含叶黄素的新天然资

3、源,测定万寿菊茎中叶黄素的含量具有重要的现实意义。同时,为广大万寿菊种植者和加工企业变废为宝,做一点有益的探索。  1仪器与试药  1.1仪器  UV2550紫外可见分光光度仪(日本岛津公司);RE5298A旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);P680型高效液相色谱仪(戴安中国有限公司);SKQ2200超声波清洗器(上海生析超声仪器有限公司);D2F6050真空干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)。  1.2试药  实验所用万寿菊茎采自辽宁医学院药园,采摘后切碎、洗净,常温干燥至恒重,粉碎过20目

4、筛以备用;叶黄素对照品(上海顺勃生物工程技术有限公司,含量≥95%)。  2方法与结果  2.1对照品溶液的配制  精密称取叶黄素标准品4.8mg置25mL棕色容量瓶中,用甲醇溶解并定容,摇匀。置于阴凉避光处保存。4  2.2供试品溶液得配制  2.2.1提取取万寿菊茎适量,研磨成粉末,过20目筛,称取粉末10g置于500mL烧瓶中,加入石油醚∶无水乙醇(3∶l)混合溶剂250mL,提取温度50℃,超声振荡提取20min。过滤,除去滤渣,将滤液置于分液漏斗中。分离石油醚层,将其旋转蒸发浓缩。  2.

5、2.2皂化在浓缩液中加人20%的氢氧化钾甲醇溶液5mL,60℃水浴加热,反应6小时。用10%的盐酸调节pH值至中性,过滤,滤渣用适量的冷水和正己烷洗涤。  2.2.3重结晶将2.2.2项下制得的滤渣溶于二氯甲烷中制得饱和溶液,向饱和溶液中慢慢逐滴加入适量的正己烷,放入冰箱中于5℃静置过夜。次日,在4000r/min的条件下离心10min,得到的沉淀物用氮气吹干,用甲醇溶解于100mL棕色容量瓶中,摇匀,得供试品溶液,阴凉避光保存。  2.3色谱条件的考察  色谱柱:DiamonsilC18(20

6、0mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇∶水=97.5∶2.5;流速:1.0mL·min-1;检测波长:445nm;柱温:室温(25℃);进样量:20μL;定量方法:外标法;理论塔板数以叶黄素峰计算,不低于8000。  2.4线性关系的考察  精密量取对照品溶液0.1、0.2、0.5、1、2、5mL,分别置于10mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,进样量20μL。以峰面积(Y)为纵坐标,叶黄素浓度(X)为横坐标建立标准曲线,回归方程为Y=0.785X+1.3466,R2=0.9996。由图1可知叶

7、黄素浓度在1.92~96μg/mL范围内,呈良好的线性关系。  2.5精密度试验  精密移取叶黄素标准品溶液(28.8μg/mL)重复进样6次,测得叶黄素峰面积,实验结果见表1,结果显示6次测定叶黄素峰面积的RSD为1.7%。  2.6稳定性试验  精密移取叶黄素标准品溶液(28.8μg/mL),每隔2h测1次其中的叶黄素含量。试验结果见表2。结果表明,在10h内叶黄素含量没有发生显著变化,保持稳定。  2.7重复性试验  精密移取叶黄素标准品溶液(28.8μ4g/mL),重复进样6次,测叶黄素峰面

8、积,实验结果见表3。结果显示,6次测定叶黄素峰面积的RSD为0.81%。  图1叶黄素的HPLC标准曲线表1精密度试验结果表2稳定性试验结果表3重复性试验结果  2.8加样回收率试验  取6份已知浓度的叶黄素样品溶液各5mL,分成3组并分别加入不同量的叶黄素标准品,定容至10mL,进样量为20μL。按上述色谱条件进行测定,计算得叶黄素的回收率在97.1%~100.2%之间,平均回收率为98.9%,RSD为1.04%。  2.9标准品、样品色谱图  见图2、图3所示。 

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