激肽释放酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶联产工艺的研究

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1、四川大学硕士学位论文激肽释放酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶联产工艺的研究姓名：罗灿申请学位级别：硕士专业：微生物与生化药学指导教师：余蓉20070501四川人学硕士学位论文胰酶中三酶联产工艺的研究激肽释放酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶联产工艺的研究微生物与生化药学专、lk研究生罗灿指导教师余蓉摘要胰酶是一种常用的医药、工业用原料药，其成本低廉易于获取，且所含活性物质种类丰富，可以作为基础原料从中提取多种生化药品，如胰激肽释放酶、弹性蛋白酶、核糖核酸酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶，羧肽酶等等，其中激肽释放酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶三种药用酶不但是目前临床

2、常用药和现代生物学研究中的重要工具，而且价格昂贵，因此以胰酶为原料提取该三酶具有巨大的经济效益和应用价值。但是由于胰酶为多种酶的混合物，每种酶的纯度很低，许多酶又具有相似的分子结构和理化性质，因此往往在提取一种酶的同时，其它酶被当作杂质处理掉了，这就导致了胰酶中三种以上酶联产的工艺极为少见，而且已有工艺都有各自的不足。随着酶分离纯化技术的发展，人们迫切需要建立新的联产工艺以适应工业化的需求。本研究考察了各种纯化方法，将离子交换层析、亲和层析和疏水层析三种分离纯化法相结合，建立了激肽释放酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶三酶的联产工艺：胰

3、酶用pH4．5醋酸缓冲溶液提取后，粗提液直接上DEAE一琼脂糖快胶柱吸附(平衡缓冲液：0．01mol／LNaoAc—HoAc缓冲液(pH4．5)，洗脱缓冲液：0．Olmol／LNaoAc—HoAc缓冲液(pH4．5)含0．2～0．35mol／LNaCl)分两步沈脱，收集激肽释放酶的洗脱峰；DEAE一琼脂糖快胶的未吸附液上亲和层析柱分批吸附(平衡缓冲液：0．01m01／LTris—Hcl缓冲液(pH7．5)，洗脱液：0．5mol／LNaCl溶液)，一次洗脱，收集胰蛋白酶洗脱峰；最后，亲和层析未吸附液用30％～80％硫酸铵分级盐

4、析处理，沉淀溶解后用上苯基一琼脂糖侠胶吸附(平衡缓冲液：0．01mol／LNaAc—HAc缓冲液(pH4，5)含lmol／L(NH。)。SO。，洗脱缓冲液：0．Olmol／LNaAc—HAc缓冲液(ptl4．5)含O～0．6mol／L(Nit。)：SO。)，分两步洗脱，收集糜蛋白酶的洗脱峰。婴型查兰堡主兰竺堡塞璧堕!三堕壁主三茎塑堡塞实验结果表明，该工艺制备的三酶比活和活性回收率较高：激肽释放酶比活为550u／mg，收率73％；胰蛋白酶比活12500u／mg，为药典标准5倍，收率79％；糜蛋白酶比活8000u／mg，为药典标

5、准lO倍，收率80％。经SOS—PAGE电泳检测，三酶所含杂带较少。该工艺操作简便快速、成本低，重复性好，具有工业化生产的潜力。关键词：胰酶，激肽释放酶，胰蛋白酶，糜蛋白酶四川大学硕士学位论文胰酶9--酶联产工艺的研究Researchofcoorperativeproductiontechnologyofkallikrein，trypsinandchymotrypsinMicrobicAndBiochemicalPharmacyPostgraduateLuoCanSupervisorYuRongabstractPancrea

6、tinisacolmnonmaterialdrugformedicaltreatmentandabiochemistryreagentinindustry，itcostslowandeasytoacquire．TherearethreeiⅢportantenzymesinpancreatin：kaltikrein，trypsinandchymotrypsin，theyareallmaterialsformodernbiologicalresearchandhavevaluableclinicuse．ItiShugeecono

7、micallyandappIicablyvaluabletoextractthethreehighcostenzymesfrompancreatin．Butpancreatinisamixtrureofvariousenzymes。eachenzymehasalowpurityandmanyenzymeshavesimilarmoleculestructureandphysicochemicalproperties，whenextractingoneenzyme，itiSeasytoabandontheotheroneasi

8、mpurity．ThiSiSwhytherearefewtechnoloiesofstimotaneousextractionofmorethanthreeenzymefrompancreatinanda11thetechnoloieshaveshortages．Bythedevelopm