蚓激酶粗提取条件的探讨

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1、蚓激酶粗提取条件的探讨谢木林1，章世元1*，王春维2（1.扬州大学动物科学与技术学院，江苏扬州225009；2.武汉工业学院动物科学与饲料工程学院，武汉430000）1983年，Mihara等从粉正蚓中分离出具有溶纤活力的粗提物，并将其命名为蚓激酶（Lumbroki－nase）[1]。对于蚓激酶的研究现在更多的偏重于其功能方面，而对于如何提取得到蚓激酶报道的较少，如何高效获取这种产品也有待于进一步探讨[2]。对于蚓激酶的提取工艺基本相同，而对其在提取中的细节，详细叙述的文章较少。本试验针对第1、第2次盐析时硫酸铵的最佳饱和度及提

2、取的最佳pH进行探讨。公司生产；DKB-501A型超级恒温水槽，上海精密实验设备有限公司生产；pH计，梅特勒-托利多仪器（上海）生产；固体硫酸铵；1.0mol·L－1盐酸；1.0mol·L－1氨水；7.8磷酸盐缓冲液：取磷酸氢二钠3.58g，加水溶解并稀释至100mL为A液，取磷酸二氢钠（NaH2PO4·2H2O）0.78g，加水溶解并稀释至500mL为B液，将A、B两液混合至pH7.8。1.2蚓激酶的提取方法[3-4]提取工艺流程为：蚯蚓原料→水洗数次→称重→加缓冲液→匀浆→离心→上清液加硫酸铵→离心→上清液加硫酸铵→离心→沉

3、淀→透析去盐→冻干→蚯蚓粗制品。蚓激酶的提取方法：取一定量的活蚯蚓，水洗数次，尽量使其内脏中的污物排出，捞出后用滤纸吸去多余水分，称重，加2倍体积的缓冲液于匀浆器中匀浆5min，于4℃冰箱中静置4h，在4℃离心机中5000rpm离心10min，取上清液加固体硫酸铵达饱和度，再于离心机中4000rpm离心10min。收集上清液，再加入固体硫酸铵调节饱和度，材料与方法11.1材料赤子爱胜蚯蚓（Eiseniafoetida）产自武汉东西湖奶牛场；ALPHA1-2型冷冻离心机，德国博励行专业仪器制造；JT-2型组织匀浆机，中国国华制造；

4、4℃透明门台式冷藏柜，青岛海尔特科冷冻有限收稿日期：2009-07-13作者简介：谢木林（1984—），男，江苏扬州人，硕士研究生，研究方向为饲料资源利用与开发。*通讯作者：教授。→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→GC-MS分析[J].粮油加工,2008（1）:68-70.[参考文献][4]GB2716-2005食用植物油卫生标准[M].北京:中国标准出版社,2005.[5]林平,姜玉梅,陈瑛.几种油料作物中脂肪酸组成的研究及探讨[J].江西科学,2000,18（2）:1

5、16-119.[6]张晓波.食用植物油的脂肪酸组成调查分析[J].黑龙江粮食,[1]动植物油脂脂肪酸甲酯的气相色谱分析.GB/T17377-1998[S]//国内贸易部谷物油脂化研究所,北京:中国标准出版社,1998.[2]柳镇安.核桃油中主要脂肪酸的毛细管柱气相色谱分析[J].化学世界,2000（4）:212-214.[3]赵华锋,谢慧明,朱霖,等.生、熟葵花籽油中脂肪酸组成的2005（4）:31-33.30饲料博览·技术版2010年第3期摘要：试验以赤子爱胜蚯蚓为原料，对蚓激酶粗提取的工艺条件进行了研究，并对pH、硫酸铵的饱

6、和度等基本工艺参数进行优化。结果表明，蚓激酶粗提取的最佳pH为7.8，第1次离心时，硫酸铵的饱和度为45%，第2次离心时，硫酸铵的饱和度为80%。关键词：蚓激酶；提取条件；分离纯化中图分类号：R977.3；O658文献标识码：A文章编号：1001－0084（2010）03－0030－03检测分析于4℃冰箱中静置过夜，4℃离心机中4000rpm离心10min。收集沉淀，然后用缓冲液溶解此沉淀物，用透析袋透析去盐或用超滤方法浓缩后，用冷冻干燥机冻干。得到淡棕色粉末状物质即为蚓激酶的粗制品。蚓激酶的产率见式1。酶最大量的溶解于上清液中

7、。pH为7.8时为最佳提取条件，提取蚓激酶的量越多，发挥的作用最强。表1pH对盐析液沉淀的影响蚓激酶产率＝（粗制品/总蚯蚓量）×100%1.3pH对盐析液沉淀的影响（1）取7支10mL的离心管，每支加入6mL盐析液，用1.0mol·L-1的硫酸和氨水调节pH（2.20、6.23、6.87、7.52、7.80、9.24、10.18）[5]，静置后，在4℃离心机中4000rpm离心10min，观察沉淀情况。1.4第1次离心所加硫酸铵最佳饱和度的测定取8支试管，向每支试管中加入6mL蚯蚓匀浆后的上清液，然后用固体硫酸铵调整该上清液的饱

8、和度（30%、35%、40%、45%、50%、60%、70%和75%），静置后，在4℃离心机4000rpm离心10min，观察沉淀情况[6-7]。1.5第2次离心所加硫酸铵最佳饱和度的测定取8支试管，每支加入5mL第1次离心后的盐析液，然后用固体硫酸铵调整该盐析