蚓激酶活性测定方法.doc

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1、蚓激酶YinjimeiLumbrokinase本品系人工养殖的赤子爱胜蚓（EiseniaFoetidaSavigny）中提取制备的一组蛋白水解酶。按干燥品计算，每1mg效价应不得少于12000单位。每1mg蛋白中蚓激酶比活力不得少于20000单位。【性状】本品为淡黄色至黄褐色粉末；味腥，有引湿性。【鉴别】（1）取本品适量，加水制成每1ml中含0.5mg的溶液，照分光光度法（中国药典2000年版二部附录IVA）测定，在278nm的波长处有最大吸收。（2）取本品适量，加0.9％氯化钠溶液制成每1ml中含10mg的溶液，作为供试品溶液；用6号针头取动物血1滴于试管底部，30

2、分钟后，加供试品溶液1ml置试管中，轻轻摇动，血凝块应在60分钟内溶解。以0.9％氯化钠溶液1ml为空白，同法操作，血凝块应不溶解。【检查】酸碱度取本品，加水制成每1ml中含1mg的溶液，依法测定（中国药典2000年版二部附录VIH），pH值应为6.0～8.0。溶液的澄清度与颜色取本品适量，加水制成每1ml中含1mg的溶液，溶液应澄清；如显色，与黄色2号标准比色液（中国药典2000年版二部附录IXA第一法）比较，不得更深。干燥失重取本品适量，以五氧化二磷为干燥剂，在60℃减压干燥至恒重，减失重量不得超过5.0％（中国药典2000年版二部附录VIIIL）。【比活力测定】

3、效价测定（1）试剂0.01mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.8）取磷酸氢二钠3.58g，加水使溶解并稀释至1000ml为A液；取磷酸二氢钠（NaH2PO4·2H2O）0.78g，加水使溶解并稀释至500ml为B液；将A、B两液混合至pH值为7.8。工作溶液取0.01mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.8）与0.9％氯化钠溶液（1:17）混合。1.5%琼脂糖溶液取琼脂糖1.5g，加工作溶液100ml加热溶解。纤维蛋白原溶液取纤维蛋白原适量，加工作溶液制成每1ml中含1.5mg的可凝蛋白溶液。凝血酶溶液取凝血酶，加0.9％氯化钠溶液制成每1ml中含1BP单位的溶液。（2）标准品

4、溶液的制备取蚓激酶标准品，用0.9％氯化钠溶液制成浓度分别为每1ml中含10000，8000，6000，4000，2000蚓激酶单位的溶液。（3）供试品溶液的制备取本品适量，加0.9％氯化钠溶液使溶解并稀释成标准曲线范围内的浓度。（4）测定法取纤维蛋白原溶液39ml，置烧杯中，边搅拌边加入55℃琼脂糖溶液39ml、凝血酶溶液3.0ml，立即混匀，快速倒入直径14cm塑料培养皿中，室温水平放置1小时，打孔。精密量取不同浓度的蚓激酶标准品溶液及供试品溶液各10ml，分别点在同一平皿中，加盖，置37℃恒温箱中反应18小时。取出后用卡尺测量溶圈垂直两直径，以蚓激酶标准品单位数

5、的对数为横坐标，垂直两直径乘积的对数为纵坐标，计算回归方程，将供试品垂直两直径乘积的对数代入回归方程，计算供试品效价单位数。标准品与供试品应各做两点，以平均值计算。蛋白含量取本品约20mg，精密称定，照氮测定法（中国药典2000年版二部附录VIID第二法）测定，将结果乘以6.25，即为供试品中蛋白含量，并计算每1mg供试品中的蛋白毫克数。国家食品药品监督管理局发布国家药典委员会审定比活力按下式计算比活力：每1mg供试品中效价单位数比活力＝每1mg供试品中蛋白的毫克数【类别】蛋白水解酶。【贮藏】密封保存。【制剂】蚓激酶肠溶胶囊