人脉络膜黑色素瘤细胞血管内皮生长因子的表达和基因抑制.pdf

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1、上海交通大学博士学位论文人脉络膜黑色素瘤细胞血管内皮生长因子的表达和基因抑制姓名：刘海燕申请学位级别：博士专业：眼科学指导教师：范先群20060501 学位论文版权使用授权书年解密后适用本授权书。⋯～节蛳 人脉络膜黑色素瘤细胞血管内皮生长因子的脉络膜黑色素瘤�������的意义及抗�肿瘤生长、抗血管形成的效应，为临床治疗�提���泶镏柿�������及��蛋白被抑制的情况。 �＝煌ù笱Р�篖学位论文结果：��和蛋白；采用��技术，质粒��蛋白的表达，有望为�治疗提供一种新方法。 ����������������� ���������������甌��������

2、����������������������������������鰁����� ������ ��������������神经纤维网蛋白������—���� 海交通人学博卜学位论文闩�脉络膜黑色素瘤���������，��浅赡耆俗疃嗉�难勰诙裥噪聁留。�等⋯分析��—��年间��目前临床上�的治疗主要包括激光光凝、放射疗法、局部肿瘤切除、眼球摘来对�的临床治疗方案存在较多争议，尚无统一标准。增殖阶段。如果没有血管生成，原发肘，瘤仪可通过扩散缓慢生长，生长不会超过�。血液循环向远处转移。血管生成的始动因素包括组织代谢负荷增加、血液供应不足及细胞本身遗传性所决定的

3、诱发血管形成的能力。肿瘤血管生成是一复杂过程，主要包括以下几个步骤：内皮细胞激活；血管局部细胞外基底膜、基质降解；内皮细胞向肿瘤细胞方向伸展、增殖和迁移；形成管腔；新生血管管腔进一步分支、相互连接；基底膜形成或周细胞包绕，新生毛细血管成熟。发生此过程的主要原因是由于肿瘤组织细胞、巨噬细胞及内皮细胞等产生的血管生成因子与抑制因子的失衡。但首要环节是肿瘤血管生成因子产生过多，与抑制因子失衡。在已知的促血管生成 ������ 海交通人学搏’卜学位论文作用，阻断��与肿瘤血管内皮细胞及肿瘤表面受体的特异性结合，是控制肿瘤生长和转移的新途径。传统阻断��的作用方法较多，如利

4、用��或��受体的单克隆抗体，阻止��与其受体的结合：采用可溶性��受体封闭��：运用酪氨酸激酶抑制剂，阻断��与其受体结合后的信号传递：将��与小分子毒性物质结合等。但由于给药方式、剂量、副作用和药物持续作用时问的限制，本课题比较人�三种细胞的生长特点和抗原表达，研究人�细胞��、 �汉＝煌ù笱Р�学位论文抑制� 第一部分人脉络膜黑色素瘤细胞的培养和��及其受体的表达第一节人脉络膜黑色素瘤细胞的体外培养和黑色素瘤抗原检测����教授 ���青一链霉素溶液�������������中国医药集团上海化学公司上海凌峰化学试剂有限公司中国医药集团上海化学试剂公司上海凌峰

5、化学试剂公司负压吸引器台式离心机��．��细胞培养基配制��� 海交通人学��卜学位论文剂、葡萄糖����．谷胺酰胺������崮���、����，调�值至��·��。��甁．�寺雎缒ず谏�亓鱿赴����、���、���窒赴��的体外培养方法�的培养皿内。��．��细胞形态学观察 ��．����漳揪�疽航������华美生物工程公司上海分公司� 海交通人学博�‘学位论史����鼠抗人����单克隆抗体兔抗人���蛋白多克隆抗体二抗�蚩雇没蚴���％中性甲醛固定液��庖咦榛�约梁��������������。�����公司��％福尔马林液固定�分钟； ��陨ḿ料陨ǎ

6、�迪驴刂葡陨�奔洌�魉�逑�分钟；酒精梯度脱水，二甲苯透明，树脂封片。��．�分钟�—�分钟�—�分钟�—�分钟�—�分钟室温 固化：过夜�肿瘤细胞呈梭型、多边型或类上皮型，细胞核较大、浅蓝色。呈圆或椭圆形一可见较多核分裂像��—�。 ���细胞呈多角型或梭形。�怪孟嗖钕晕⒕祒��� ����细胞呈多角型或梭形，核明显，圆形或椭园形。��旧ǎ�饩祒������������� ���细胞呈多角型或梭形，核较大。��旧ǎ�饩祒���������赴�世嗌掀ぱ�蛩笮危�舜蟆��染色，光镜×��用��ú馊�窒赴�天的吸光值��，图�。 第二天第二天第四天�����第而天��

7、�土���纎第八天���甀���±�������������细胞����一�������庖咦榛�旧ň�Q粜�图���，胞浆呈棕黄色�饩怠��倍�５玍����泶镒钋苛摇���表达最弱。��赴鸙����庖咦榛�旧�Q粜�图�����首鼗粕�光镜��倍�５獺��、���免疫组化染色呈阴性反应�����，胞浆未被染色。图�是免疫组化染色空白对照组，图中是��赴�１�是三种瘤细胞的黑色素抗原免疫组化总结。 �饩怠��饩祒����饩祒����� ���细胞����免覆组化染色���������������赴鸖����������趴�� �汉＝煌ㄈ搜Р㊣浩±位论文� ����

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