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《microRNA_449抑制脉络膜黑色素瘤细胞的增殖和迁移_王教》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、实用肿瘤杂志2009年第24卷第6期·535·microRNA-449抑制脉络膜黑色素瘤细胞的增殖和迁移3王教,陈晓燕,瞿佳(温州医学院眼视光学院,浙江温州325027)摘要:目的探讨脉络膜黑色素瘤细胞M21转染microRNA2449后对增殖和迁移的影响,及其分子机制的初探。方法采用阳离子脂质体Lipofectamine介导的方法,将microRNA2449转染入体外培养的人脉络膜黑色素瘤细胞。应用MTS法检测转染后细胞增殖的影响;Transwell小室检测细胞迁移的变化;Westernblotting检测c2Met蛋白的表达。结果转染microRNA
2、2449后,脉络膜黑色素瘤细胞增殖明显被抑制(P<0101),迁移亦受抑制(P<0101),c2Met表达量下降。结论转染microRNA2449对体外培养的人脉络膜黑色素瘤细胞的增殖和迁移具有抑制作用,microRNA2449可下调c2Met蛋白的表达水平。关键词:黑色素瘤ö治疗;脉络膜肿瘤ö治疗;微RNAs;基因疗法;增生;转染;基因表达中图分类号:R739.7文献标志码:A文章编号:100121692(2009)0620535204脉络膜黑色素瘤是成人最常见的眼内恶性肿瘤酶(Invitrogen公司),microRNA2449由上海吉玛生[1]之一
3、,易侵袭转移。microRNAs(miRNAs)是一类物技术有限公司合成,荧光标记的随机序列RNA由分布广泛的非编码蛋白质的小RNAs,其功能是负Ambion公司合成,Lipofectamine2000(Invitrogen[2]调控基因表达。研究表明,miRNAs可以抑制重要公司),MTS细胞增殖分析试剂(Promega公司),的肿瘤相关基因的表达,可能在癌症的诊断和治疗Transwell(CorningCostar,8Lm孔径),c2Met抗体[3]中起重要作用。最近的研究表明,microRNA2449(SantaCruz公司),硝酸纤维素膜(GE公
4、司),[4](miR2449)在脉络膜发育过程中起重要作用。但SpectraMaxM5酶标仪(MolecularDevices公司)。miR2449对脉络膜黑色素瘤细胞生长的影响尚未见112实验方法报道。本研究通过阳离子脂质体介导的方法将miR211211人脉络膜黑色素瘤细胞的获取培养人脉449转染入人脉络膜黑色素瘤细胞,并应用MTS法络膜黑色素瘤细胞株M21(由美国纽约大学附属眼和Transwell法,探讨miR2449对脉络膜黑色素瘤细耳医院胡诞宁教授惠赠)采用含10%胎牛血清胞的生长增殖和迁移的影响。c2Met被认为是肿瘤(FBS)的DMEM培养液
5、,置37℃、5%CO2培养箱中发生发展的促癌因素之一,对肿瘤发生、生长和转移培养。[5]起着关键的作用。c2Met蛋白表达下调则抑制肿11212转染将对数生长期的M21细胞接种于多瘤细胞的增殖和迁移。本研究采用Westernblotting孔培养板,根据Lipofectamine2000转染说明书,配技术,在蛋白水平上检测c2Met的表达变化,探讨制转染液:无血清、无双抗的DMEM培养液中混合miR2449作用的分子机制。适量microRNA和Lipofectamine,室温放置15分钟后,每孔转染50nmolöL的miR2449,37℃、5%CO21材
6、料和方法培养箱中孵育培养。以相同方法转染随机序列RNA111试剂与仪器(Oligo)作为阴性对照。以相同方法转染CY3荧光标DMEM(DulbeccoModifiedEalge’sMedium)记的随机序列RNA观察转染效率。培养基和胎牛血清FBS(Invitrogen公司)及胰蛋白11213细胞增殖实验于96孔板中每孔接种3×310个M21细胞,24小时后每孔转染50nmolöL的收稿日期:2008212230miR2449或随机序列RNA,每组设6个复孔。继续培基金项目:国家自然科学基金项目(30772385)作者简介:王教(19792),女,浙江温
7、州人,温州医学院养72小时,每孔换为100LL培养液,并加入20LL眼视光学院实验员,硕士,从事眼科学基础研究.MTS试剂,37℃继续孵育3小时显色,用酶标仪于3490nm波长下读取光密度值(OD)。按以下公式计通讯作者:E2mail:jqu@wz.zj.cn·536·JournalofPracticalOncologyVol.24No.62009算细胞生长抑制率:细胞生长抑制率=(对照组OD499对细胞增殖的影响。如图2所示,对照组平均OD值-实验组OD值)ö对照组OD值×100%。值为01950,miR2499组平均OD值为01615,与对照1121
8、4细胞迁移实验接种M21细胞于24孔板相比,转染miR2449之后M21细胞减少
