植物细胞内氧化应激活性氧超氧阴离子红色荧光测定试剂盒产

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1、植物细胞内氧化应激活性氧超氧阴离子红色荧光测定试剂盒产品说明书（中文版）主要用途植物细胞内氧化应激活性氧超氧阴离子红色荧光测定试剂是一种旨在通过透膜荧光染色剂二氢溴化乙啶，在细胞氧化条件下，产生红色荧光，来检测细胞内超氧阴离子活性氧族的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种其适用于新鲜植物组织（例如根尖、叶片等）和培养细胞等细胞内氧化应激活性氧的分析。可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老和代谢等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定，滞留持久，荧光清晰。技术背景超氧自由基阴离子（superoxideradical；O2-

2、）、过氧化氢（hydrogenperoxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxylradical；OH-）、过氧化基（peroxylradical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxylradical）、氮氧基（nitricOxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitriteanion；ONOO-）次氯酸（hypochlorousacid；HOCl）、半醌自由基（semiquinoneradical）、单线态氧气（singletoxygen）等细胞内活性氧族（ReactiveOxygenSpeci

3、es；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。二氢溴化乙啶（Dihydroethidiumbromide；Hydroethidine；DHE）是一种完全自由通过细胞膜，并在细胞内长期滞留而不外漏的染色剂。一旦被超氧自由基阴离子氧化，二氢溴化乙啶转化为溴化乙啶，进入细胞核，与DNA紧密结合，便产生荧光。据此证明细胞内超氧阴离子活性氧族的存在。产品内容清理液（ReagentA）毫升固着液（ReagentB）毫升离析液（ReagentC）毫升染色液（ReagentD）微升产品说明书1份保存方式保存染色液（ReagentD）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；

4、固着液（ReagentB）和离析液（ReagentC）具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证6月用户自备胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（GMS12024）：用于细胞脱离完全细胞培养液（GMS12052）：用于细胞操作所需的培养基15毫升锥形离心管：用于细胞操作的容器1.5毫升离心管：用于染色液配制的容器载玻片：用于组织染色操作解剖针：用于植物组织解剖5血细胞计数仪：用于细胞计数（微型）台式离心机：用于样品处理培养箱：用于染色孵育比色皿或酶标板：用于荧光定量分析的容器（共聚焦）荧光显微镜：用于荧光分析细胞流式仪：用于用于细胞染色分析荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于荧光定量分析实验步

5、骤方法一：活体组织染色1．加上xx微升清理液（ReagentA）在载玻片上2．切取新鲜植物根尖，放进载玻片上的清理液（ReagentA）中3．用解剖针小心压碎根尖4．小心移去清理液（ReagentA）5．小心加上xx毫升清理液（ReagentA）在根尖上6．再加上xx微升染色液（ReagentD）7．放进37℃培养箱里孵育20分钟8．取出载玻片，移去染色液9．小心加上xx毫升清理液（ReagentA）10．小心移去清理液（ReagentA）11．盖上盖玻片，用拇指小心且垂直加压12．即刻在（共聚焦）荧光显微镜下进行观察：激发波长540nm，散发波长590nm――红色荧光增

6、强，表明超氧阴离子含量高方法二：组织固定染色1．加上xx微升清理液（ReagentA）在载玻片上2．切取新鲜植物根尖，放进载玻片上的清理液（ReagentA）中3．用解剖针小心压碎根尖4．小心移去清理液（ReagentA）5．小心加上xx毫升固着液（ReagentB）6．室温下，孵育3小时，避免干化7．小心移去固着液（ReagentB）8．小心加上xx毫升清理液（ReagentA）9．小心移去清理液（ReagentA）10．小心加上xx毫升离析液（ReagentC）11．室温下孵育5分钟12．小心移去离析液（ReagentC）13．小心加上xx毫升清理液（ReagentA

7、）14．小心移去清理液（ReagentA）13．小心加上xx毫升清理液（ReagentA）在根尖上14．再加上xx微升染色液（ReagentD）51．放进37℃培养箱里孵育20分钟2．取出载玻片，移去染色液3．小心加上xx毫升清理液（ReagentA）4．小心移去清理液（ReagentA）5．盖上盖玻片，用拇指小心且垂直加压6．即刻在（共聚焦）荧光显微镜下进行观察：激发波长540nm，散发波长590nm――红色荧光增强，表明超氧阴离子含量高方法三、培养植物细胞脱离染色1．准备1瓶25cm2细胞培养瓶的待测细胞2．小心抽去细胞培