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1、云南植物研究%##"，=>（%）：%,,U%,!46),?%),(36,@.((,(36,植物中超氧阴离子自由基测定方法的改进!!!李忠光，龚明（云南师范大学生命科学学院，云南昆明!"##$%）摘要：通过对植物超氧阴离子自由基测定反应中动力学曲线的分析，确定了最佳的反应介质、反应参数和羟胺浓度，以三氯甲烷代替乙醚作为植物色素萃取试剂，克服了植物超氧阴离子测定中存在的诸多问题，提高了测定结果的准确性、重复性和可比性。关键词：植物；超氧阴离子自由基；测定方法中图分类号：&$’"文献标识码：(文章编号：#%")*%+#（#%##"）#%*#%,,*#!!"#$%&’"’()%*+’,-.
2、$’"’()+’)/%0*%$1.#’$%230’4(3%(5,036,73(87,()""-./0123456723，5895:;23（!"#$$%$&’(&)!"()*")+，,-**.*/$01.%2*(3)0+(45，<62=;23!"##$%，>0;27）49-)$,6)：?0;@A7ABC727DE@BFG;2BH;I@I6CJB1K@6ABC1L;FB72;12C7F;I7DCB7IH;23M;H00EFC1LED7=;2BN8AH;=6=CB7IH;12=BF;6=，CB7IH;12A7C7=BHBC@72F0EFC1LED7=;2BI12IB2HC7H;12MBC
3、BI12K;C=BFN?0BCB4@6DH;2F;I7HBFH07HI0B=;I7DCB73B2HI0D1C1K1C=;2@HB7F1KBH0EDBH0BC7@BLHC7IH;12CB73B2H1KAD72HA;3=B2H，1JBCI1=BF@1=BAC1ODB=@1K=B7@6CB=B2H=BH01FK1C@6ABC1L;FB72;12C7F;I7D;2AD72H，72FB2072IBFH0B7II6C7IE，CBAC1F6I;O;D;HE72FI1=A7C7O;D;HEN:’;<%$0-：PD72H；Q6ABC1L;FB72;12C7F;I7D；:B7@6CB=B2H=BH01
4、F植物细胞在其生命活动过程中，由于叶绿体、线粒体和质膜上每时每刻都发生着电子传递过程中电子的泄露，因而不可避免地会产生大量的活性氧，如过氧化氢（R%8%）、超N*N氧阴离子自由基（8%）、羟自由基（8R）等（李忠光等，%##)）。近几年的研究表明，活性氧在植物对环境胁迫的信号感受、传导与适应过程中起重要作用（李忠光和龚明，%##)）。因此，准确测定活性氧浓度无疑在植物抗逆性研究中起着非常重要的作用。N*常见的植物8测定方法有化学发光法、9S?法、细胞色素法、邻苯三酚法、肾上腺%素法和羟胺氧化法（王爱国和罗广华，,$$#；TD@H2BC72FRB6ABD，,$+!）。但由于干扰因素!
5、基金项目：国家自然科学基金（)#’!##,!）、云南省自然科学基金（%##’>##),:）、国际合作计划（%##%5R#!）及教育部高校优秀青年教师教学科研奖励计划（%##,年度）!!通讯作者：(6H01CK1CI1CCB@A12FB2IBNT*=7;D：3123=;23VA6OD;IWG=WE2WI2收稿日期：%##’*#$*#X，%##’*,%*#%接受发表作者简介：李忠光（,$+,*）男，彝族，实验师，云南省永德县人，主要从事植物逆境生物学研究。T*=7;D：/012336723—D;V,!)WI1=电话：#X+,*"",+)$’4!4云南植物研究40卷颇多，实际应用时困难不
6、少。羟胺氧化法测定植物超氧阴离子自由基具有灵敏度高，专一性较好，药剂价廉等特点（王爱国和罗广华，!""#；$%&’()*+(,-)./)%，!"01）。但是，这一方法在实际应用中存在许多问题：首先是色素的干扰；其次是以正丁醇为萃取液有时与反应介质分层不明显，而以乙醚为萃取液，则反应介质位于下层，给比色带来不便；第三5是酸度对显色反应的影响、内源23的干扰、羟胺的自氧化以及反应介质浑浊等，针对465这些问题，我们作了以下修改，以适合植物3的准确测定。4!材料和方法!"!植物材料的培养挑选饱满的玉米（!"#$#%&）品种大黄的种子，以#7!8-9:%4消毒!#;<(后，漂洗干净，于41
7、7=>下吸涨!4?，播于垫有1层湿润滤纸的带盖白磁盘（4@A;B!1A;）中，于417=>下黑暗中萌发1#?。随后，移植于腐植土中，同样的温度下于人工气候箱中继续培养，每天于!##·;54·&5!的光强下光照!;C%!@?，培养期间定期补充水分。!"#酸对显色反应的影响张志良（!""#）和D)’)*&等（4##E）在测定植物365时，反应介质所用的酸不一样，所用酸的浓度也4不一样，为了探讨不同的酸对显色反应速度及检测235灵敏度的影响，我们用相同浓度的不同酸为反4应介
