酶联免疫吸附分析法测定水产品及水中孔雀石绿和无色孔雀石绿

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1、酶联免疫吸附分析法测定水产品及水中孔雀石绿和无色孔雀石绿第22卷第1期2010年1月化学研究与应用ChemicalResearchandApplicationVoI.22.No.1Jan.,2010文章编号:1004—1656(2010)01-0042-05酶联免疫吸附分析法测定水产品及水中孔雀石绿和无色孑L雀石绿邢玮玮,王榕妹,王俊卿,杨红,贺莉,邓安平h(1.四川大学化学学院,四川成都610064;2.四川大学华西药学院,四川成都610041)摘要:本文报道一种同时测定水产品及水样中孔雀石绿(MG)和无色孔雀石绿(LMG)的间接竞争酶联免疫吸附分析法.

2、对无色孔雀石绿分子进行修饰,使其与载体蛋白交联,得到免疫原和包被抗原,经过多次免疫动物制得抗无色孔雀石绿的多克隆抗体.在优化的实验条件下,Ic值(标准曲线中吸光度抑制至最大吸光度值的50%时所对应的待测物浓度)为0.9～2.6g/L,检出限为0.02—0.10Ixs/L,无色孔雀石绿在水样及水产品中的回收率为76.2～95.O%,与孑L雀石绿的交叉反应率为95.25%.真实样品测定中,两种食用鱼养殖水样及一个鱼样中未检出孔雀石绿和无色孑L雀石绿,但在观赏鱼养殖水样及另一鱼样中检出孔雀石绿和无色孔雀石,浓度分别为1.84g/L和1.38L.关键词:孔雀石绿;

3、无色孔雀石绿;酶联免疫吸附分析法;食品分析中图分类号:0621.3文献标识码:ASensitiveenzyme-linkedimmunosorbentassayfordeterminationofmalachitegreenandleucomalachitegreeninfishandfishpondwatersamplesXingWei—wei',WANGRong.mei,WANGJun.qing,YANGHong,HELi,DENGAn—ping(1.CollegeofChemistry,SichuanUniversity,Chengdu610064,

4、China;2.WestChinaSchoolofPharmacy,SichuanUniversity,Chengdu610041,China)Abstract:AnindirectcompetitiveELISAforthedeterminationofmalachitegreenandIeucomalachitegreeninfishandfishpondwatersamplesWaSdeveloped.Leucomalachitegreenmoleculewasmodifiedandcoupledtocarrierproteinstomakethec

5、oatingantigenandimmunogen.TheantibodiesagainstLMGwasobtainedfromrabbits.Basedontheoptimizedconditions,IC5ovalue(concentrationofanalyteproducing50%ofabsorbancedecreaseinstandardcurve)anddetectionlimitWasfoundintherangeof0.9～2.6IXg/Land0.02～0.IOIXg/L.respectively.RecoveriesofLMGinwa

6、terandfishsampleswere76.2%一95.0%.Thecross—reactivityofantibodywithMGWasfoundtobe95.25%.NodetectableMGandLMGandwasobservedinonefishsampleandtwofishfarmingwatersamples;whiletheMGandLMGconcentrationsinonepetfishpondwatersampleandanotherfishsamleweref0undat1.84IXg/Land1.38s/L,respecti

7、vely.Keywords:Malachitegreen;Leucomalachitegreen;Enzyme—linkedimmunosorbeutassay;foodanMysis收稿日期:2009-04-28:修回日期:20094)5-23基金项目:国家自然科学斌金资助项目(20675054)联系人简介:邓安平(1962.),男.教授,博士生导师,研究方向免疫分析.Email:denganping6119@yahoo.com.cn化学研究与应用第22卷1.3免疫原及包被抗原的制备利用重氮化法¨将无色孔雀石绿修饰物与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(O

8、VA)交联,制成免疫原及包被抗原.具体步骤如下:40rag氨基无色