表皮生长因子受体反义重组腺病毒对乳腺癌细胞作用的实验研究

《表皮生长因子受体反义重组腺病毒对乳腺癌细胞作用的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、中国人民解放军军医进修学院硕士学位论文表皮生长因子受体反义重组腺病毒对乳腺癌细胞作用的实验研究姓名：李运军申请学位级别：硕士专业：肿瘤学指导教师：马林20050519兰墨篓竺兰堕竺±主堕旦兰———————————————一中英文名词对照与缩写ＣＭＶＤＡＢＤⅣ匝ＭＤＭＳＯＣｙｔｏｎｌｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ３，３‘一ｄｉｍｉｎｏｂｅｚｉｄｉｎｅＤｕｌｂｅｃｃｏＭＥＭＤｉｍｅｔｈｙＩｓｕｆｏｘｉｄｅ巨细胞病毒二甲基联苯胺ＤＭＥＭ培养液二甲基砸砜ＥＤＴＡＥｔｈｙＩｅｎｅｄｉａｍｉｎｅ—ｔｅｔｒａａｃｅｔｉｃａｃｉｄ乙＿胺Ｆｑ乙

2、酸ＥＧＦＲＦＣＭＨＲＰｌＨＣｌＲＭＴＴＭＤＡ－ＭＢ一２３１ＭＶＤＥｐｉｄｅｒｍａｊＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒＲｅｃｅｐｔｏｒＦｌｏｗＣｙｔｏｍｅｔｒｙＨｏｒｓｅｒａｄｉｓｈｐｅｒｏｘｉｄａｓｅＩｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｌｎｈｉｂｉｆｉｏｎＲａｔｅ３－（４．５－ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚ０１．２一ｙｔ）一２，５－ＤｉｐｈｅｎｙｌｔｅｒａｚｏｌｉｕｍｂｒｏｍｉｄｅＭｉｃｒｏｖｅｓｓｅｌｄｅｎｓｉｔｙ表皮生长因了受伟流式细胞术辣根过氧化物酶免役组织化学绌胞生Ｋ｛ｌｌＪ划哥二四甲基偶氮唑盐人乳腺癌细胞系微血管密度ＰＢＳ

3、ＰｈｏｓｐｈａｔｅＢｔｔｆｆｅｒｅｄＳａｌｉｎｅ磷酸盐缓冲液ＰＥＰＩｒｐｍＳＦＰｌａｔｉｎｇＥｆｆｉｃｉｅｎｃｙＰｒｏｐｉｄｉｔｕｎＩｏｄｉｄｅＲｏｕｎｄｐｅｒｍｉｎｕｔｅＳｕｒｖｉｖｉｎｇＦｒａｃｔｉｏｎ接种效率碘化丙啶每分钟转数存活分数军医进修学院烦士学位论文表皮生长因子受体反义重组腺病毒对乳腺癌细胞作用的实验研究中文摘要目的：表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）是原癌基因ＨＥＲｌ（ｃ—ｅｒｂＢｌ）的表达产物，在许多肿瘤细胞中超量表达、基因扩增和／或突变，并借助其介导的信号传导使细胞生长失控和恶性转化。在乳腺癌实验模型上

4、，我们发现ＥＧＦＲ的表达随着肿瘤发生能力的增强而提高，而且ＥＧＦＲ反义ＲＮＡ表达载体可逆转转化表型。为了寻求治疗乳腺癌的新手段，我们开发了ＥＧＦＲ反义重组腺病毒，并通过观察其对人乳腺癌ＭｏＡ—ＭＢ一２３ｌ细胞的体外增殖作用情况，以及对其放疗敏感性的影－向，初步探讨其作为治疗乳腺癌新手段的机制。实验方法：人乳腺癌细胞系ＭＤＡ－ＭＢ一２３１常规培养，细胞计数绘制细胞生长曲线；人ＥＧＦＲ的ｃＤＮＡ片段被反向亚克隆入Ｅｌ／Ｅ３缺失的５型腺病毒载体中而得到ＡｄＥ５，ＥＧＦＲ反义ＲＮＡ的表这由ＣＭＶ启动子控制；进而用细胞培养和流式细胞仪（

5、ＦＣＭ）技术研究其对人乳腺癌细胞株ＭＤＡ－ＭＢ一２３ｌ凋亡及细胞周期分布的影响，比较联合ｖ一射线对ＭＤＡ－ｂＩＢ－２３１克隆形成率及细胞周期分布的作用。实验结果表明：（１）ＭＤＡ－ＭＢ一２３１细胞被ＡｄＥ５感染后，ＥＧＦＲ蛋白质的表达被强烈地抑制，但并不导致细胞凋亡；（２）ＡｄＥ５感染后以Ｙ一射线照射细胞，克隆形成率被抑制。且这种作用与病毒量和照射剂量相关联；（３）进而流式细胞仪分析显示，３００ｐｆｕ／细胞的ＡｄＥ５转染可使ＭＤＡ－ＭＢ－２３１细胞摆脱对放射线抗拒的Ｇ０／ＧＩ期，进入对放射线敏感的Ｃ２／Ｍ期，从而使ｈｄＥ５联合

6、放射表现为协同效应。结论：以腺病毒载体介导的ＥＧＦＲ反义ＲＮＡ转导可有效地用于针对ＥＧＦＲ的反义治疗策略，抑制肿瘤的生长，提高教谢。线对乳腺癌细胞杀灭作用。其中，其影响肿瘤生长的因素不在于诱导肿瘤细胞的凋亡，而其导致细胞Ｃ２／Ｍ军医逍修学院硕十学位睑文期阻滞可能正是增加肿瘤放射敏感性的主要机制。这些现象的分子生物学机制仍有赖于我们的进一步深入研究。【关键词］表皮生长因子受体反义腺病毒乳腺癌车医进修学院坝十学位论支ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＲｅｓｅａｒｃｈｏｆＥｆｆｅｃｔｓｏｆＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＥＧＦＲＡｎｔｉｓｅｎｓｅＡｄｅ

7、ｎｏｖｉｒｕｓｏｎＢｒｅａｓｔＣａｎｃｅｒＣｅｌｌｓＡｂｓｔｒａｃｔＯｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＥＧＦＲｉｓａｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｗｉｔｈａｔｙｒｏｓｉｎｅｋｉｎａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｉｔｓｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｄｏｍａｉｌ．Ｉｔｓｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｈａｓｂｅｅｎｄｅｔｅｃｔｅｄｉｎｍａｎｙｍａｌｉｇｎａｎｔｔｕｍｏｒｓ．ＴｈｅｒｅｆｏｒｅＥＧＦＲｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｌａｙｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｄ

8、ｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｍａｌｉｇｎａｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ．Ｉｎａｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｍｏｄｅｌ，ｗｅｆｏｕｎｄｔｈａｔＥＧＦＲｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｕｇｍｅｎｔｅｄｗｉｔｈｔｕｍｏｒｉｇｅｎｉｃｉｔｙ，ａｎｄｔｈｅｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｐ