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1、浅议牛耳枫中芦丁的含量测定 【摘要】 目的建立牛耳枫的质量鉴测指标。方法采用薄层色谱鉴别,高效液相色谱法测定牛耳枫中芦丁的含量,高效液相色谱条件Hypersil柱(4.6mm×250mm,10μl),流动相:甲醇-0.4%磷酸溶液(35∶65)。结果高效液相法测定牛耳枫中芦丁,方法重现性好,准确可靠。结论该方法可用于牛耳枫中芦丁的含量测定。 【关键词】 牛耳枫;芦丁;高效液相色谱;薄层色谱 1 仪器与试药 1.1 仪器 高效液相色谱仪:HP1100DAD检测器,十万分之一电子天平。 1.2 试药 芦丁对照品:中
2、国药品生物制品检定所,批号080-9303,牛耳枫:购于广州市药材公司,甲醇(色谱纯):天津四友,硅胶G:青岛海洋化工厂。2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱:依利特HypersilC18(4.6×250mm,10μl),流动相为甲醇-0.4%磷酸(35∶65),流速为1ml/min,检测波长为360nm。 2.2 对照品溶液的制备 精密称芦丁对照品适量,置容量瓶中,加甲醇制成每1ml含25μg的溶液,即得。供试品溶液的制备:取牛耳枫药材粉末0.5g,精密称定,加入乙醚50ml,超声15min,滤过,去弃乙醚液,药渣待
3、挥干乙醚,药渣精密加甲醇50ml,称定重量,水浴回流1h,补足减失的甲醇重量,滤过,去弃初滤液,续滤液作供试品。测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl,注入色谱仪,测定,即得。 2.3 分离度试验 吸取芦丁对照品溶液、供试品溶液按上述方法测定,见图1、2。结果:样品中芦丁的分离度良好。 2.4 标准曲线 取芦丁对照品溶液(0.016704mg/ml),分别进样5μl、10μl、15μl、20μl,按试验方法项下的色谱条件测定其峰面积。以芦丁进样量(μg)为纵坐标,色谱峰的面积为横坐标,绘制标准曲线,结果表明,芦
4、丁在0.0835~0.3341μg的范围内,其进样量与色谱峰面积呈良好的线性关系。回归方程:Y=0.0007X+0.0029,相关系数r=0.9997。 2.5 稳定性试验 取样品按含量测定项下的色谱条件测定其峰面积,每隔2h测1次,连续测4次,结果:样品在8h内测定是稳定的,RSD=0.82%。 2.6 精密度试验 取对照品溶液(0.016704mg/ml),分别等量10μl进样5次,按上述实验方法项下的色谱条件测定,RSD=0.6%。 2.7 重现性试验 取样品一式5份,按含量试验项下的条件测定,计算芦丁积分面积,
5、结果:RSD=2.1%。 2.8 回收率试验 取已测定含量(0.736mg/g)的供试品约0.25g,精密称定,再精密加入0.1739mg芦丁对照品,按上述供试品溶液的制备方法制备和测定,一式5份,其结果见表1。表1 回收率试验结果表明:本测定方法的平均回收率为98%,基本符合要求。3 4批样品的含量 取样品分别按含量测定项下的方法分别测定,其结果见表2。表2 4批样品含量 4 讨论 牛耳枫中芦丁含量测定的流动相,还考察了流动相甲醇-水(35∶65)[2]、流动相甲醇-水-乙腈-冰乙酸(30∶57.5∶10∶2.5)[
6、3]。采用流动相甲醇-水(35∶65),芦丁峰有少许拖尾。采用流动相甲醇-水-乙腈-冰乙酸(30∶57.5∶10∶2.5),芦丁峰分离效果较好,但要采用4种溶剂,成本也较高,而采用甲醇-0.4%磷酸溶液(35∶65),芦丁峰分离效果也好,且成本低、简便。 【参考文献】 1黄泰康.常用中药成份与药理手册.北京:中国医药科技出版社,1994,1700. 2全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编(上册).北京:人民卫生出版社,1988,897-898. 3邓富良,陈本美.高效液相色谱法测定槐米中的芦丁含量.湖南医科大学学报
7、,2006,25(6):597-598
