芦丁的纯化及其含量测定

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1、芦丁的纯化及其含量测定作者：赵文彬，许玉华，王鲁石，莫民栋【摘要】目的制备高纯度芦丁的目的是用作对照品或满足其它特殊需要的试剂。方法从槐米中提取芦丁，并将其制备成对照品。采用既简便又经济的酸提碱沉法从槐米中提取芦丁，经过精致，分离得芦丁对照品，并用一般方法、薄层层析法、核磁共振法进行鉴定，高效液相法测定其含量。结果经化学法、薄层层析法鉴定，核磁共振鉴定表明芦丁样品与芦丁标准品图基本一致；高效液相测得含量98.05%。结论此种实验室制备芦丁对照品的方法操作简单易行，产品纯度较高可作为对照品代替标准品用。【关键词】芦丁；分离；纯

2、化；高效液相色谱法；含量测定　　Abstract：ObjectiveToestablishthemethodsforpurification,identificationanddeterminationofrutinreferencesubstance.MethodsExtractrutinfromSophorajaponicaL.bythealkaliextractionandacidprecipitation.Thenrefinementandseparationoftherutinreferencesubstancea

3、linethecontentofrutin.ResultsAfteridentifiedbychemicalpleofrutinandthechartofstandardsubstanceous,themeancontentpleandpractical.Theproductsareverypure,soitcanbeusedinplaceofsubstancereplacedstandardsubstance.　　Keyination芦丁是一种分布广泛的黄酮类化合物，主要存在于槐米，芸香，荞麦，沙棘等植物。黄酮类化合物在心

4、脑血管疾病的治疗上起到了举足轻重的作用，芦丁［utin,又称芸香苷(rutnoside)］便是其中的一个典型代表，其效用同维生素P。能降低毛细血管通透性和脆性，促进细胞增生和防止血细胞凝聚以及抗炎、抗过敏、利尿、解痉、镇咳，降血脂等方面的作用［1］，临床上芦丁主要用于高血压病的辅助治疗和用于防治因芦丁缺乏所致的其它出血症，如防治脑血管出血、高血压、视网膜出血、紫癜、急性出血性肾炎、慢性气管炎，血液渗透压不正常恢复毛细血管弹性等症，同时还用于预防和治疗糖尿病及合并高血脂症［2］，国内外医药工业中用芦丁作原料生产芦丁片、维脑路通

5、(羟乙芦丁)、芦丁镁、槲皮素等心血管药物［3］。芸香苷广泛应用于医药，保健食品和化妆品中。在食品工业中芦丁除了可作保健品外，还可作为抗氧剂和天然食用黄色素。在化妆品行业，芦丁是目前较为理想的一种天然广谱防晒剂［4］，本实验拟探究一种实验室制备高纯度芦丁的方法，用作对照品或满足其他特殊需要的试剂。　　1仪器与试剂　　1.1仪器　　高效液相(l烧杯中，加沸水、硼砂搅拌，于石棉网上加热至微沸，然后加入适量饱和石灰水溶液，保持pH8～9之间，并不断地搅拌，微沸30min后，过滤，滤液收集，滤渣在置于500ml烧杯中，加沸水ml，硼砂

6、搅拌，于石棉网上加热至微沸，然后在加入适量饱和石灰水溶液，调pH8～9之间，并不断的搅拌，微沸30min后，过滤，滤渣弃去，滤液合并，待滤液温度降至60～70℃之间时用浓盐酸调pH4～5之间，当温度降至室温时放入冰箱静置12h，使沉淀完全，抽滤，沉淀用蒸馏水洗至中性，干燥得粗品芦丁，蒸馏水重结晶，得精制芦丁。　　2.2芦丁的纯化用葡聚糖凝胶柱进一步分离纯化，称取精制芦丁0.25g，用少量甲醇使之溶解，加入葡聚糖凝胶柱顶，用甲醇洗脱，试管收集，15ml/管，共收集22管，用聚酰胺膜鉴定芦丁并作如下合并收集液。第1瓶1～10管，

7、第2瓶11～22管；然后水浴浓缩至原液的一半，冷置，仅第一瓶出现黄绿色微细针状结晶，再继续浓缩，60℃干燥即得芦丁纯品。　　2.3芦丁的鉴定　　2.3.1一般鉴定　　本品为黄色结晶粉末，熔点经梯勒熔点管测定熔程为188～190℃，与　　2.3.2薄层层析鉴别纯度　　用3cm×5cm的聚酰胺膜，选3种展开剂：分别为A，丙酮∶水（3∶1）；B，氯仿∶甲醇（5∶4）；C，醋酸乙酯∶甲酸∶水（8∶1∶1）。氨熏后喷显色剂3%的三氯化铝显色，经重结晶的芦丁样品在上述3种展开剂中均显两个斑点，Rf值较低的点与槲皮素标准品的Rf值相等，因

8、此证明芦丁中含有少量槲皮素。继续用葡聚糖凝胶分离纯化，结果芦丁在上述3种展开剂中，只显一个斑点。结果见图1。　　2.3.3氢核磁共振法鉴定　　由图可表明芦丁样品与芦丁标准品图一致，结果见图2。　　2.4芦丁含量测定(HPLC法)　　2.4.1色谱条件　　流动相为甲醇4.3%乙酸(55∶45