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1、一、分光光度法的特点二、可见分光光度法与紫外的区别三、分光光度计测定物质含量的原理四、工作曲线法测定芦丁含量五、本次实验注意事项六、仪器的操作讲解提纲分光光度法的特点（包括紫外和可见）分光光度法与其他测定方法比较有这样一些特点1、首先，它的应用广泛，在国际上发表的有关分析的论文总数中，分光光度法占28%，我国约占所发表论文总数的33%。2、灵敏度高，由于新的显色剂大量合成，并在应用研究方面取得了重要进展，使得测定物质的灵敏度提高。3、选择性好，目前有些元素只要控制适当的显色条件就可以直接进行光度法测定。4、准确度高，浓度测量的相对误差在1～3%范围5、分
2、析成本低，操作简便快速。可见分光光度法与紫外的区别：1、光源不同，紫外用氢灯作光源，可见用钨灯2、测定波长不同，紫外波长范围180～350nm可见波长范围320～10003、可见需显色，紫外不需显色可见分光光度测定中通常是被测物质与显色剂反应，生成有色物质，然后测定其吸光度，进而求得被测物质的含量。分光光度计测定物质含量的原理：（紫外与可见基本相同）均采用一个能产生多个波长的光源，通过系列分光装置后产生特定波长的光源，光源透过被测样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，由比尔-朗白定律求得样品的浓度。实验八工作曲线法测定芦丁含量可见分光光度法一、实验目
3、的（1）掌握可见分光光度计的使用（2）掌握光电比色的一般操作。（3）学会用作图法及计算器回归法求芦丁样品的浓度芦丁又名芸香甙，维生素P，属黄酮类化合物，临床上主要用于治疗脑溢血，高血压，视网膜出血等疾病。芦丁的含量测定有高效液相色谱法，紫外分光光度法和可见分光光度法。黄酮类化合物的结构性质结构中含有酚羟基和环酮基结构，可与某些金属盐试剂生成有色络合物，在510nm波长处有吸收，用可见分光光度计测其含量。二、实验原理本实验利用什么原理本实验利用黄酮甙与亚硝酸钠、硝酸铝反应在碱性时显红色的反应测定芦丁的含量。1显色反应的完全程度（取决于）：介质的pH显色剂的
4、用量反应温度反应时间要使得测定浓度准确 应当考虑影响测定准确的因素：2吸光度的物理测定条件如何确定反应最佳条件在建立方法时，需要通过实验确定最佳反应条件，为此改变其中一个因素（例如介质的pH值暂时固定其他因素，显色后测量相应溶液的吸光值，通过吸光度-pH曲线确定反应的酸度范围，其他几个影响因素的适宜值也可以按这一方法分别确定。三、实验内容仪器光电分光比色计使用方法见附件比色皿的校核将同样厚度的四个比色皿分别编号标记，都装空白溶液，在所用波长（510nm）下比较各比色皿的透光率，应相同，若有显著差异，应将比色皿重新洗涤后再装空白溶液测试，经洗涤可使透光率的
5、差异减小时，可通过多次洗涤使透光率一致。若经几次洗，仍然不一致可如下校正：以透光率最大的比色皿为100%透光，测定其余各皿的透光率，分别换算成吸收度作为各比色皿的校正值。测定溶液时，以上述100%透光率的比色皿作空白，用其他各皿装溶液，测得吸收度值然后碱去所用比色皿的校正值。芦丁的测定（标准曲线制备与芦丁测定一起完成）精密移取芦丁标准溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml和样品液3.0ml置10ml容量瓶中→各加30%乙醇使成5.0ml→各精密加入亚硝酸钠溶液（1→20）0.3ml,摇匀，放置6分钟→各加硝酸铝（1→20）0.3ml,摇匀，再
6、放置6分钟。→各加氢氧化钠试液4ml,用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置15分钟。在510nm波长下测定各瓶溶液的吸收度（以第一瓶作空白）以浓度为横坐标，吸收度为纵坐标，绘制标准曲线。测定样品的浓度。芦丁的测定各试剂用量编号1234567标准溶液(ml)01.002.003.004.005.00样品溶液(ml)3.0030%乙醇(ml)5.004.003.002.001.002.00NaNO2(ml)全部都加0.30ml,摇匀后放置6分钟Al(NO3)3(ml)全部都加0.30ml,摇匀后放置6分钟NaOH(ml)全部都加4ml,摇匀后放置15分钟后在510
7、nm条件下测定A结果1、列出浓度C与吸光度A对应表格2、用作图法绘制芦丁工作标准曲线3、用计算器回归求标准曲线方程A=()C+(),要求r=0.998以上4、从图中读出芦丁的浓度,并计算瓶中芦丁样品的浓度5、计算器回归求芦丁样品的浓度并计算瓶中芦丁样品的浓度。注意事项移液管,容量瓶的正确使用NaOH每吸一次可以放两个,比色杯不要甩容量瓶易翻倒,注意放好注意放的时间NaNO2加0.3ml,不是0.03ml.标准浓度看黑板,各浓度要计算蒸馏水要加至刻度后摇(用滴管),容量瓶拿在手上看刻度浓度的测定,以1号为空白,从低浓度至高浓度来测.数据当场交,报告回去做.
8、四、思考题 相同厚度的各比色皿透光性不一致时，为什么要在经过多次洗涤后各皿透光率
