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《链霉菌udp-葡萄糖脱氢酸编码基因ste的克隆表达和性质研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、链霉菌UDP-葡萄糖脱氢酸编码基因Ste6的克隆表达和性质研究遗传学报ActaGeneticaSinica,November2005,32(11):1213—1220SSN0379—4172Cloning,ExpressionandCharacterizationoftheSte6GeneEncodingaUDP-glucoseDehydrogenaSeinLIHao,WANGLing—Yah,XUGui-Yun,CHENYang,JIANGRong',LIYuan''①(1.InstituteofMed
2、icinalBiotechnology,ChmeseAcademyofMedicalSciences,Be?枷9100050,China2.1nst
3、tuteofChemistry.CheeseAcademyofSciences,Be{jlng,00080chInaAbstract:Streptornycessp.139wasidentifiedtoproduceanewexopoIysaccharideEbosin(139A)withanti—rheumaticarthritisactivityvivo
4、.TheEbosinbiosynthesisgenecluster(31.3kb:GenBankAccessionNumber:AY131229)containing22ORFs(stel—ste22)ofStreptomycessp.139hadbeenreportedpreviously.Inthispa-per,wepresentexperimentalevidencefortheidentityoftheste6geneproductasaUDP—glucosedehydrogen—ase(UDP
5、GDH).WithpET-30aasvector,thegenewasclonedandexpressedinEscherich~coilBL21(DE3).Theexpressedproteinwaspurifiedtohomogenei~byHis—BindresinaffinitychromatograpyanditwasabletocatalyzeUDP—glucosetoUDP—glucuronicacid.Toevaluatethefunctionofste6,thegenewasdisrup
6、tedbyasingle--crossoverhomologousrecombinationeventandtheresultshowedthatste6isrequiredinEbosinbiosyn??thesis.Keywords:ste6;UDP-glucosedehydrOgenase;genedisruption;Ebosinbiosynthesis链霉菌UDP-葡萄糖脱氢酸编码基因Ste6的克隆表达和性质研究李颢',王玲燕',徐桂云,陈阳,(1中国医学科学院医药牛物技术研究所2.中国科学院化
7、学研究所,北京姜蓉',李,北京100050;100080)元',①摘要:链霉菌139能够产生一种全新的胞外多糖——依博素(139A),该多糖体内具有显着抗类风湿性关节炎活性.其生物合成基因簇(GenBankAccessionNumber:AY131229)已被鉴定约31.3kb,包含22个开放阅读框(stel～ste22).以pET一30a为载体,克隆并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行了ste6基因的表达,对该基因的克隆,表达与性质进行了研究.亲和层析法证实,纯化后重组蛋白具有催化UDP-葡萄糖脱氢变成
8、UDP-葡萄糖醛酸的活性.这表明ste6编码产物是葡萄糖脱氢酶.为了证实ste6基因与依博素生物合成的关系,采用单交换基因破坏策略构建了ste6基因阻断突变株.结果初步显示ste6和依博素生物合成相关.关键词:ste6;UDP-葡萄糖脱氢酶;基因阻断;依博素生物合成中图分类号:Q786文献标识码:A文章编号:0379-4172(2005)11-1213-06收稿日期:2005—01—07;修回日期:2005—03—09基金项目:国家高科技项目基金(编号:2001AA一21409)[Suppodedbyth
9、eChineseNationalHighTechnologyProject(No.2001AA一21409)]作者简介:李颢(1981一)男,江苏南京人,在读硕士生,研究方向:微生物与生物药学①通讯作者.E-mail:yuanwli@263.net;Tel:010-63153320l214遗传学报ActaGeneticaSinicaVo1.32No.112005Cell—surfacepOIysaccharidescancom
