胎兔与成兔皮肤瘢痕基因差异表达的分析

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1、胎兔与成兔皮肤瘢痕基因差异表达的分析作者：吴志远,孙雪峰,罗少军,江黎明单位：524001广东省湛江市，广东医学院附属医院整形外科研究所(吴志远、罗少军、江黎明)；河北北方学院附属第二医院(孙雪峰)【摘要】目的探讨胎兔及成兔皮肤瘢痕基因表达变化的特征及其可能的生物学意义。方法建立动物模型，收集胎兔及成兔皮肤愈合处的皮肤组织，用基因芯片技术检测胎兔及成兔皮肤瘢痕的基因表达变化规律。结果基因芯片高通量地揭示了胎兔及成兔皮肤瘢痕的基因表达变化的信息，差异表达基因有117个，其中下调的基因有28个，上调的基因有89个，涉及十大

2、类基因。结论胎兔及成兔皮肤瘢痕的基因图谱存在差别，这些基因可能参与了瘢痕的形成过程。【关键词】皮肤基因芯片基因表达AnalysisofexpressedgenesinfetalrabbitskinandthescarofadultrabbitWUZhiyuan，SUNXuefeng，LUOShaojun，etal.GuangdongMedicalCollege,Guangdong,Zhanjiang524001【Abstract】ObjectiveToanalysethechangesofgenesandthei

3、rbiologicsignificancethatoccurredinfetalrabbitsskinandthescarofadultrabbits.MethodsTheanimalmodelwasestablished,andthesampleswereobtainedfromthefetalrabbitsskinandthescarofadultrabbits,andrulesofexpressedgenesinallthesamplesweredetectedbyusinggenechip.ResultsGen

4、echipdisclosedalargescaleofinformationincurrentstduy.117differentgenesinfetalrabbitsskinandthescarofadultrabbitwerefound,inwhich28weredownregulatedand89wereupregulated.ConclusionTherearedifferencesofgeneexpressionbetweenfetalrabbitsskinandthescarofadultrabbits

5、byusinggenechipanalysis,andmaybethesegenesareinvolvedinthedevelopmentofscarinrabbits.【Keywords】rabbits;scare;genechip;geneexpression目前对皮肤的认识已深入到分子领域，寻找皮肤瘢痕形成过程中的相关特异性基因已显得十分必要。本实验通过基因芯片技术研究胎兔及成兔皮肤瘢痕基因表达变化的待征，探寻皮肤瘢痕形成过程中的基因表达规律，实现基因水平调控皮肤创伤修复和组织再生及瘢痕形成中得到直接的预防和干预

6、手段。　　1材料与方法　　1.1标本来源及收集　　建立动物模型，取孕22d的成兔3只，在麻醉下暴露孕兔背部，切取面积为2cm×1cm的全层皮肤，予以原位缝合，然后将孕兔行剖腹术，按同样方法，取一只胎兔行手术。继续饲养8d，取原孕30d的成兔，切取原手术处皮肤及瘢痕组织，共获3组标本，多聚甲醛固定，包埋切片备用。　　1.2总RNA抽提和测定　　按Chomczynski等［1］提出的一步法，分别抽提胎兔皮肤组织和成兔瘢痕组织的总RNA，用Licd沉淀法纯化后紫外分析及电泳检测显示获得了高质量的纯净总RNA。　　

7、1.3mRNA分离纯化　　按照OligotexmRNAspincolumnprotocol［2］分离纯化mRNA，紫外分析其质量。　　1.4芯片制备　　美国SuperArray公司提供含14784基因芯片。用通用引物进行PCR扩增，PCR引物长度为13000bp，靶基因以0.5μg/μl在硅烷化玻片上点样，点样后玻片凉干备用。　　1.5表达谱探针制备　　参照Schena［2］方法标记cDNA探针并纯化，用Cy3dTUP标记胎兔皮肤组织cDNA,Cy5dTUP标记成兔皮肤瘢痕组织。　　1.6杂交与扫描及

8、结果的分析　　将基因芯片与制备探针杂交后，扫描Cy3Cy5两种荧光信号的强度和比值，用专用软件分析，差异表达的标准为基因表达变化在2倍以上为阳性。　　1.7统计学分析　　本次实验均采用背部相同部位皮肤标本，采用两两比较和聚类分析方法。　　2结果　　2.1总RNA抽提结果　　各标本提取的总RNAA250/A280值达1.817～1