两种乳酸菌产酸培养基筛选及产酸分析

《两种乳酸菌产酸培养基筛选及产酸分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、两种乳酸菌产酸培养基筛选及产酸分析崔卫东龙涛王炜侯新强杨蓉张涛新疆农业科学院微生物应用研究所，乌鲁木齐　830091关键词：乳酸菌高效液相色谱新疆威仕达生物工程股份有限公司研制的“高效青贮复合菌”是由2株乳酸菌、1株纤维素分解菌和1株乙酸产生菌复合而成的，利用这几株菌的协同作用，可调节青贮料内微生物区系，调控青贮发酵过程，促进乳酸菌大量繁殖，更快地产生乳酸，促进多糖与粗纤维的转化，提高青贮饲料的质量。本文研究了其中的2株乳酸菌在发酵条件下产生乳酸的情况，初步确定了这2株乳酸菌的产酸培养基，并采用层析法进行了定性分析，采用高效液相色谱法进行了定量分析

2、。1试验材料1.1菌株乳酸链球菌（Streptococcuslactis），SL植物乳杆菌（Lactobacillusplantarum），LP均由新疆农业科学院微生物应用研究所提供。1.2培养基1.2.1碳源培养基筛选C1：C2：C3：葡萄糖3%，玉米浆5%，酵母膏0.5%，Tween800.1%，CaCO32%，KH2PO40.1%，pH5.5~6.0蔗糖2%，其余同C1淀粉2%，其余同C1按上述配比配制培养基，每瓶200ml（500ml三角瓶），90KPa、105℃灭菌30min。1.2.2氮源筛选N1N1-0N2N2-0蔗糖2%（碳源筛选中

3、确定），玉米浆5%（氮源），酵母膏0.5%，KH2PO40.1%，Tween80水溶液（50mg/ml）0.5%，CaCO32%不添加CaCO3，pH5.5~6.0，其余同N1蔗糖2%，蛋白胨0.5%（氮源），其余同N1不添加CaCO3，pH5.5~6.0，其余同N2按上述配比配制培养基，每瓶200ml（500ml三角瓶），90KPa、105℃灭菌30min。1.3仪器设备分光光度计：ShimadzuUV-120-02数显pH计：MettlerToledo320真空浓缩旋转蒸发仪：BuchiV-80自动指示旋光仪：WZZ-1高效液相色谱仪：安捷伦1

4、100高速离心机；显微镜；旋转式摇床；恒温培养箱；电子天平；灭菌锅；净化工作台。1.4玻璃器皿灭菌的90mm平皿、1ml吸管、500ml锥形瓶、18×180试管、移液管等。2试验方法2.1培养基筛选2.1.1碳源筛选SL、LP菌株经二次斜面活化，制菌悬液，等量接种C1、C2和C3培养基各1瓶，分别于37℃（SL）和30℃（LP）静置培养。于9hr、12hr、18hr、35hr取样，测pH、30倍稀释液540nm的OD值、苯酚-硫酸法〔1〕测发酵液中残糖量，根据发酵液pH变化，菌体生长速率，糖消耗率确定利用率高、产酸量大的碳源作为产酸培养基的碳源。注

5、：制备发酵液30倍稀释液时，（1）含CaCO3的发酵液取样0.5ml，加1mL2NHCl溶液，再加13.5ml蒸馏水，即得。（2）不含CaCO3的发酵液取样0.5ml，直接加14.5ml蒸馏水，即得。2.1.2氮源筛选SL、LP菌株经二次斜面活化，制菌悬液，等量接种，分别于37℃和30℃静置培养。于14hr、22hr、40hr取样，测N1和N2的30倍稀释液540nm的OD值，N1-0和N2-0的pH、30倍稀释液540nm的OD值，根据发酵液pH变化，菌体生长速率，确定利用率高、产酸量大的氮源作为产酸培养基的氮源。2.1.3确定产酸培养基及培养条

6、件根据2.1.1和2.1.2的结果，确定这两株菌的产酸培养基和培养条件，制备发酵液。2.2乳酸定性分析2.2.1样品制备〔2〕发酵液中加入5%碳酸钙，搅拌后，缓缓加入硫酸至pH2.0，高速离心机5000rpm离心10分钟，取上清，经真空旋转蒸发浓缩到原体积的1/10即得。2.2.2纸层析法测乳酸〔3〕以2%乳酸为对照(CK)，与样品平行点样，层析。2.3液相色谱法定量测定乳酸2.3.1样品制备发酵液经高速离心机3000rpm离心10min，取上清5ml，加入0.2mol/l磷酸进行酸化，用水定容至10ml，0.3um膜过滤，上机测定。2.3.2色谱

7、条件色谱柱：C18柱10μm×0.5μm×4.6mm×30mm;流动相：0.01moL/l磷酸氢二铵（用1moL磷酸调pH至2.70，临用前用超声波脱气）;流速：1ml/min;进样量：20μl;紫外检测波长：214nm3结果与分析3.1产酸培养基筛选3.1.1碳源筛选（1）不同碳源培养基乳酸菌OD、pH比较样品9hr12hr18hr35hr菌株培养基ODpHODpHODpHODpHSLC10.0474.420.0904.070.0373.860.0893.72C20.1624.210.2933.870.2463.200.3983.06C30.15

8、24.440.2393.890.2453.910.3393.92LPC10.0664.350.1203.860.1373.