时间分辨荧光免疫分析法与放射免疫分析法检测甲胎蛋白的效能比较

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1、时间分辨荧光免疫分析法与放射免疫分析法检测甲胎蛋白的效能比较作者：杨凤爱,林荣军,茹辽金,王征,邝敏健单位：(1.广东省阳江市人民医院检验科，广东阳江529500;　2.广州达瑞抗体工程技术有限公司，广东广州510663)【摘要】目的比较时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)与放射免疫分析(RIA)两种方法检测甲胎蛋白(AFP)的效能。方法对TRFIA与RIA两种方法测定AFP进行线性检测、精密度实验、临床对比实验及相关性分析。结果TRFIA法检测AFP的线性范围为1～1210μg/L，比RIA的1～900μg/L宽;检测精密度：TRFIA分析内CV%为3.8%～4

2、.3%，分析间CV%为4.9%～5.8%;RIA分析内CV%为5.8%～8.6%，分析间CV%为6.4%～9.5%;两种方法呈显著正相关(r=0.986，P<0.01)。结论TRFIA法优于RIA法。【关键词】时间分辨荧光免疫分析;放射免疫分析;甲胎蛋白甲胎蛋白(alphafetoprotein,AFP)是肝细胞肝癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)诊断和判断预后首选的血清肿瘤标记物。定量检测AFP的方法主要包括酶标法(EIA)、放射免疫法(RIA)、化学发光免疫分析法(CLIA)和时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)，目前我国常规多采用RI

3、A法。RIA法虽然有较高的灵敏度和准确性等优点,但其试剂存在放射性污染，且标记物半衰期短，试剂不易保存，且检测重现性差。上个世纪80年代兴起的TRFIA法具有灵敏度高、稳定性好且无放射性污染等优点，被认为是目前最有发展前景的超微量分析方法之一[1]。本文是比较TRFIA法和RIA法检测AFP的效能。　　1材料与方法　　1.1仪器与试剂　　TRFIA所用检测仪器为DEFIA1235全自动时间分辨荧光免疫分析仪(美国芬兰PerkinElmer公司产品)，AFPTRFIA试剂由达瑞抗体工程技术有限公司技术部提供，为广州达瑞抗体公司自行研制产品;RIA所用仪器为SN697全自动

4、双探头放射免疫r计数器(上海原子核研究所日环仪器一厂产品)，AFPRIA试剂为天津九鼎医学生物工程有限公司提供(产品批号：RC40801)。操作均按各自试剂盒说明书严格进行。　　1.2方法　　两法检测AFP均采用双抗体夹心法，TRFIA法标记物为稀土元素Eu3+，RIA法标记物为放射性元素125I。　　TRFIA法：AFP标准品或样品25μL/孔→200μL分析缓冲液→室温振动孵育1h→洗涤液洗板3次→1：75倍稀释的铕标抗体200μL→振动孵育1h→洗涤液洗板6次→增强液200&mu

5、;L/孔→振摇5min→测定荧光值，自动换算AFP值(TRFIA法的正常参考范围为0～12U/mL,超过12U/mL判为阳性)。　　RIA法：100μL样品+125IAFP+100μL抗血清混匀，37℃温育3h，测总T(每分钟脉冲数)，与此平行同做NSB管(非特异性管)、SO管(最大吸收管)、标准管，各管加分离剂1000μL，混匀，室温孵育15min，3500r/min离心15min，弃上清，r计数仪测定各管衰变率(RIA法正常参考范围为0～20μg/L,超过20μg/L判为阳性)。　　1.3入选标本　　本院保健科体检排除

6、各种恶性疾病者30人(男18例，女12例，平均年龄43岁)为正常对照组;住院确诊为肝癌者30人(男21例，女9例，平均年龄56岁)为肝癌组;住院确诊为肝硬化者30人(其中男23例，女7例，平均年龄58岁)为肝硬化组。后两组均经影像学检查、手术及病理切片检查或肝活检确诊。均于早晨空腹抽血3mL经4000r/min离心10min(肝癌组患者均于手术前抽血)，取血清一部分用于RIA检测(在本科室完成)，另一部分于EP管中密封置-20℃冷冻保存(集中于广州市达瑞抗体工程技术有限公司技术部进行TRFIA法检测)。　　1.4统计学处理　　用SigmaPlot10.0统计软件进行数据统计

7、分析，采用单因素方差分析及q检验、卡方检验及相关、回归分析。　　2结果　　2.1剂量反应曲线的线性　　TRFIA法：将AFP参考标准品(达瑞抗体公司提供)稀释成不同的浓度进行测定(两步法)。以各参考标准品浓度的对数为横坐标，以荧光值1×103计数的对数为纵坐标，做AFPTRFIA标准曲线，并由AutoDELFIA1235自带的LogLog函数处理。标准曲线线性范围为1～1210μg/L，当质量浓度值大于2000μg/L时，所测荧光值不再按线性升高，即Hook出现。而RIA法：用试剂盒内