豚鼠耳蜗核sp阳性神经元向下丘的投射┐hrp逆行追踪与免疫组化双标论文

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1、豚鼠耳蜗核SP阳性神经元向下丘的投射┐HRP逆行追踪与免疫组化双标论文.freelmunohistochemistryAbstract:AIMTostudythedistributioncharacteristicsofsubstanceP（SP）immunoreactive（SP-IR）positiveneuronsincochlearnucleusandprojectionpatternoflabeledneuronsandSP-HRPdoublelabeledneuronsfromcochlear

2、nucleustoinferiorcolliculus（IC）.METHODSImmunohistochemistryandhorseradishperoxidase（HRP）retrogradetracingtech-niqueainlyindorsalcochlearnucleus（D）.ButSP-IRpositiveneuronsmainlyinven-tralcochlearnucleus（V）.ThecircularstructureofSPpositiveterminalsaroundth

3、eSPpositiveneuronsalsoainlyinan-teroventralcochlearnucleus（AV）andDofcontralat-eralcochlearnucleus，butposteroventralcochlearnucleus（PV）berofHRP-labelledneuronsinPVofipsilateralaybeoneofneurotransmitterormod-ulatorofauditoryascendingprojection.0引言P物质（SP）作为

4、初级感觉神经递质已为很多实验所证实.新近的研究表明，Corti器内毛细胞底部广泛分布SP和SP受体免疫反应阳性的神经纤维及末梢［1，2］.HRP追踪结合SP免疫反应双标的研究也证实，在豚鼠螺旋神经节有两种不同类型的SP阳性神经元向耳蜗核投射［3］.结果证实SP是一种耳蜗的传入神经信息物质.为探讨豚鼠耳蜗核SP阳性神经元的分布状态及是否作为次级听觉信号传入神经递质或调质，我们采用下丘注入辣根过氧化物酶（HRP）逆行追踪，结合耳蜗核内SP免疫反应阳性神经元的双标研究，从形态学方面提供SP作为听觉信号次级传入

5、神经元的神经递质及调质的进一步证据.1材料和方法1.1材料耳廓反射灵敏，体质量320～380g健康杂色豚鼠20只，雌雄不拘.戊巴比妥钠（30mgkg-1）腹腔麻醉后，置于脑立体定向仪上.按邵殿华等［4］的方法对下丘进行立体定位.定位后行颅骨钻孔，用玻璃微管（外径35μm）缓慢加压注入300gL-1HRP（Sigma，RZ=3.14）2μL.1.2方法动物存活48h后，再用过量戊巴比妥钠腹腔麻醉，开胸经心动脉插管，生理盐水冲出血液，1.33molL-1多聚甲醛加50mmolL-1戊二醛800mL灌注固定.

6、断头后，剥除颅骨，取下脑干，用1.33molL-1多聚甲醛再固定4h，然后置于0.73molL-1蔗糖磷酸缓冲液（pH7.4，4℃）直至沉底.耳蜗核行40μm连续冰冻切片，每隔两张切片分成1组，共分3组，分别行SP免疫组化反应［1］.HRP反应［3］及HRP-SP反应.后者先行HRP反应，再行SP免疫组化反应.免疫组化对照试验用同等稀释度的正常家兔血清稀释液替代SP抗体，其他试剂及步骤不变.2结果2.1耳蜗核SP┐IR阳性物的分布在耳蜗核内可见大量呈串珠状的阳性纤维及终末，纤维粗细不同，多数含有明显的膨

7、体，相互交织呈网状.背侧核的纤维及终末密度大于腹侧核.SP阳性神经元主要分布在耳蜗前腹核及后腹核，呈圆形、椭圆形、大小不等.耳蜗背侧核的内侧部也可见8～9个SP-IR阳性神经元（Fig1）.在耳蜗前腹核，SP阳性神经纤维行径弯曲，膨体较少，阳性终末呈棕黄色点状颗粒，并可见SP阳性终末包绕SP阳性神经元呈环状分布（Fig2）.2.2HRP耳蜗核逆行标记神经元的分布左侧下丘注入HRP，逆行标记细胞分布在右侧耳蜗前腹核、耳蜗背侧核和左侧的耳蜗后腹核，用钨酸钠-四甲基联苯胺（TMB）呈色后，标记细胞呈蓝绿色，大

8、小不等，形态各异.在耳蜗背侧核，HRP标记细胞体积较大，有多个突起，主要分布在颗粒细胞层，呈半环形结构.耳蜗前腹核HRP标记细胞呈团状，分布密集，几乎占据整个前腹核（Fig3）.2.3耳蜗核SP阳性神经元向下丘的投射左侧下丘注入HRP结合耳蜗核SP免疫组化反应表明，在右侧的耳蜗前腹核可见数量较多的HRP-SP双标记细胞（Fig4），约占耳蜗前腹核标记细胞的44%，SP单标细胞占标记细胞的50%，HRP单标细胞占标记细胞的6%.HRP-SP双