重组别藻蓝蛋白对小鼠h22肿瘤生长及cox2、vegf和pcna表达的影响论文

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1、重组别藻蓝蛋白对小鼠H22肿瘤生长及COX2、VEGF和PCNA表达的影响论文【摘要】目的观察重组别藻蓝蛋白（rAPC）对接种H22细胞小鼠的肿瘤生长及环氧化酶2（COX2）、血管内皮生长因子（VEGF）、增殖细胞核抗原（PA）表达的影响，并初步探讨其可能的机制。方法昆明小鼠随机分为5组（n=10），即模型组,rAPC低、中、高剂量组（25、50、100mg·kg-1·d-1）,环磷酰胺组（CY对照组）。各组小鼠左前腋下皮下接种H22肝癌细胞，第2天除模型组外，其余4组分别以不同剂量的rAPC、CY灌胃，

2、15d后处死，剥离出肿瘤，称质量.freelorgroiceandapproachitspossiblemechanism.MethodsKunmingmiceizedtofivegroupsasthemodelgroup,loiddle,andhighdoserAPCgroups(25,.freelg·kg-1·d-1,respectively),andCyclophosphamidegroup(controlgroup)iceineachgroup.H22cellspitofthemice.Anima

3、lsofthefourgroups,exceptthemodelgroup,orsoved,orinhibitionratecalculated;theexpressionsofCOX2,VEGFandPAinthetumorinedimmunohistochemically.ResultsTheincreaseoftumoriddle,andhighdosegroupsodelgroup(F=23.651;q=4.476-11.307;P0.01),theexpressionofPAinmiddlea

4、ndhighdoserAPCgroupsodel(F=164.380;q=1.513-31.265;P0.01).ConclusionrAPCinhibitstumorgroice.［KEYBP）标签的重组别藻蓝蛋白(rAPC)。已有研究表明，rAPC对小鼠S180肉瘤及H22肝癌模型均具有显著的抑制效果3，但其抗肿瘤活性的机制仍未知。环氧化酶2（COX2）是一种诱导酶，多数恶性肿瘤COX2过度表达，且其表达水平与肿瘤的发生、发展、预后和转移有密切的关系。血管内皮生长1期徐清燕，梁惠，秦松.重组别藻蓝蛋

5、白对小鼠H22肿瘤生长及COX2、VEGF和PA表达的影响23因子(VEGF)和增殖细胞核抗原（PA）可促进肿瘤间质血管的生成，也是导致肿瘤细胞不断生长繁殖，进而产生浸润转移的原因之一。本文应用动物实验及免疫组织化学的方法，研究rAPC对昆明小鼠H22肿瘤组织中COX2、VEGF及PA表达的影响，并初步探讨其可能的机制，以寻找具有高度生物活性的新的海洋药物。1材料与方法1.1材料1.1.1rAPC由中国科学院海洋研究所提供。1.1.2实验动物及瘤株清洁级昆明小鼠50只，体质量18～23g，雄性，由青岛市实验

6、动物中心提供。小鼠肝癌细胞株，由中国医学科学院药物研究所引进，山东省医学科学院药物研究所药理室低温冻存保种，复苏后传5、6、7代的细胞悬液。1.1.3主要试剂新生牛血清，购自Gibico公司。兔抗人COX2抗体、兔抗人PA抗体以及兔抗人VEGF抗体，均购自青岛宏达通生物技术有限公司。DAB显色试剂盒、SP染色试剂盒均购自北京中山生物技术有限公司。注射用环磷酰胺（CY，每瓶0.2g），江苏恒瑞医药股份有限公司生产。1.1.4仪器LEICARM2135切片机(德国)，ZMN7803型自动组织包埋机(常州华利电子

7、公司产品)，生物图像分析系统(江苏捷达科技公司提供)，OLYMPUSBX50显微镜(日本OLYMPUS公司产品)，SimplePCI图像分析系统（V5.2，pixInc，美国）。1.2方法1.2.1动物模型的建立50只昆明小鼠购进后适应性喂养1周，每只小鼠于右前肢腋窝皮下接种密度为2×109/L的H22瘤细胞悬液0.2mL。24h后，随机分为5组：模型组(给予生理盐水0.5mL灌胃),rAPC低、中、高剂量组（分别给予25、50、100mg·kg-1·d-1rAPC灌胃）,CY组（给予CY40mg·kg-1·

8、d-1腹腔注射），每组10只。各组均连续给药2周。1.2.2样品采集末次给药24h后，小鼠称体质量，处死。无菌条件下解剖小鼠，完整剥离出肿瘤，准确称质量，计算抑瘤率。抑瘤率=（对照组平均瘤质量-给药组平均瘤质量）/对照组平均瘤质量×100%。1.2.3COX2、VEGF、PA表达检测采用免疫组织化学法。取新鲜肿瘤组织常规做石蜡切片，按SP试剂盒说明染色，DAB显色，中性树胶封固，镜检