用均匀设计优选栀子柏皮汤半仿生法提取的工艺条件

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1、用均匀设计优选栀子柏皮汤半仿生法提取的工艺条件154天津中医药2011年4月第28卷第2期TianjinJournalofTraditionalChineseMedicineApr.2011,Vo1.28No.2用均匀设计优选栀子柏皮汤半仿生法提取的工艺条件术荆汉卫,孙秀梅2张兆旺27黄延亮(1.山东中医药大学研究生,济南250014;2.山东中医药大学,济南250014)?中药研究?摘要:[目的]优选栀子柏皮汤半仿生提取工艺条件.[方法]采用均匀设计法,在方药规格,煎提温度,煎提用水量,滤过,浓缩等条

2、件相同的情况下,以分子量≤1000u提取物,栀子苷,小檗碱,甘草次酸,总生物碱为指标,综合评判,优选该方药半仿生提取的工艺条件.[结果]3煎用水的pH值依次为2.0311,7.4955,8.4193,3煎总计时间为4.0162h.【结论】结合实际生产,确定3煎用水的pH值依次为2.0,7.5,8.5;提取时间依次为2,1,lh.关键词:栀子柏皮汤;半仿生提取法;均匀设计;综合指标中图分类号:R285.5文献标识码:A文章编号:1672—1519(2011)02—0154—04栀子柏皮汤源自《伤寒杂病论》

3、,由栀子,黄柏,甘草组成.在美景度评判(SBE)法研究取得较多成果的基础上,本实验以栀子柏皮汤为模型,分子量≤1000u提取物为最终产物,对该产物作栀子苷,小檗碱,甘草次酸,总生物碱的测定,综合分析评判,优选该方药用SBE法提取较佳的工艺条件.1仪器与药品精密pH计(PHS一3C型,上海雷磁仪器厂);电子分析天平(MAI10型,上海第二分析仪器厂);高效液相色谱仪(1100系列,美国AgiLent公司);紫外分析仪(UV3010型,日立公司);医用超声波清洗器(KQ一250E型,昆山市超声仪器有限公司)

4、;中空纤维超滤膜(DH一系列,上海德宏生物医学科学科技发展有限公司).方药经山东中医药大学张兆旺教授鉴定:栀子为茜草科植物栀子(GardeniaasminoidesEllis.)的干燥成熟果实;关黄柏为芸香科植物黄檗(PheLLoden—dronarnurenseRupr)干燥树皮的机切丝片;甘草为豆科植物甘草(GyrrhizauralensisFisch.)干燥根及根茎的机切厚片.对照品栀子苷(批号:110749—200613),盐酸小檗碱(批号:111595—200604),甘草次酸(批号:723—

5、9002)均购自中国药品生物制品鉴定所,甲醇,乙腈均为色谱纯,水为超纯水,其余试剂均为分析纯.基金项目:国家科技部国际科技合作项目(2007DFA31180).作者简介:荆汉卫(1986一),男,硕士研究生,研究方向为申药新药研发与中药炮制原理研究.通讯作者:孙秀梅.2实验方法与结果2.1实验方法为保证实验的可比性和可重复性,在饮片规格,煎煮温度,煎煮用水量,滤过,浓缩等条件相同的前提下,确定考察的主要因素及水平,见表1.选用均匀设计U.(91x3)表f中国航天工业总公司第三研究院提供)安排实验方案,见

6、表2.表1因素与水平Tab.1Factorsandlevels因素水平123456789第1煎pH(A)2.002.503.003.504.004.505.005.506.00第2煎pH(B)6.506.506.507.007.007.007.507.507.50第3煎pH(C)8.008.008.008.508.508.509.009.009.00煎煮时间h(D)2.002.002.003.503.503.505.005.005.00表2U.(91x3)实验设计表Tab.2U9(91x3)Experi

7、mentaldesigntable注:括号内数字依次为第l,2,3煎的煎提时间.2011年4月第28卷第2期天津中医药Apr.2011,Vo1.28No.2TianjinJournalofTraditionalChineseMedicine1552.2样品液的制备按处方比例称取方药粗粉(10～20目之间)47.5g,照表2布点实验,常压下加热回流提取3次(溶剂量依次为方药重量的10,8,8倍;浸泡30rain),分别将3煎提取液依次粗滤,离心(3500r/min,25min),一定规格的中空纤维膜滤过,

8、合并,浓缩,定容至100mL,得样品液SBE.(质量浓度为475g/L).2.3供试液的制备精密吸取2.2项下样品液SBE各10mL,分别置蒸发皿中,水浴浓缩至近干,加硅藻土2.5g,拌匀,蒸干,研匀,移至具塞锥形瓶中,加甲醇l0mL,密塞,称质量,超声提取30min,放冷,补足失质量,抽滤,定容至10mL,即得供试液A(质量浓度为475g/L).精密吸取供试液A各0.5mL,分别定容至10mL,得供试液B(质量浓度为23.75g/L).精