老龄肾阳虚证的差异表达基因谱分析论文

《老龄肾阳虚证的差异表达基因谱分析论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、老龄肾阳虚证的差异表达基因谱分析论文李炜弘雍小嘉范怀昌谭从娥张天娥王米渠【摘要】目的采用基因表达谱芯片技术，分析老龄肾阳虚证的发生与基因表达异常间的联系。方法筛选肾阳虚证患者3名和正常对照者3名，采用美国Affymetrix公司的HG-u133Plus2.0基因表达谱芯片，通过组间比较，筛选出老龄肾阳虚患者差异表达基因。结果芯片数据组间比较分析后获得34条差异表达基因，聚类分析得到6条有特征性地差异表达基因，主要涉及细胞周期和凋亡，肿瘤发生以及免疫。结论老龄肾阳虚证的发生涉及一系列免疫紊乱的复杂的过程.freeleandthedifferentiallyexpressedgen

2、esbycDNAarrary.MethodsThreekidney-Yangdeficiencypatientsandthreehealthypeopleplesduringtheepidemiologicsurveyofthekidney-Yangdeficiencysyndrome.ThedifferentiallyexpressedgenesetrixGeneChip.Results34mondifferentiallyexpressedgenesorigenesisandimmunityeisrelatedtothedysfunctionoftheimmunesyste

3、m,maybeclosedrelatedtobodyageingasmuneresponse;Ageing随着人类基因组计划的深入，尤其是功能基因组学研究技术的不断发展，在基因表达谱芯片技术平台上［1］开展的“证候-基因表达谱”研究从一个新的视角，系统、全面地深化人们对中医证候的认识，把证候与分子网络的功能联系起来。在以往对肾阳虚的研究中，已进行肾阳虚半定量化操作标准［2］以及虚寒证、心阳虚证等基因芯片实验研究［3］提示，肾阳虚证一定具有特定的分子生物学基础；肾阳虚的辨证论治其理其法在基因水平、分子水平有深层次的科学依据。研究中还发现年龄是“证”的基因表达不可忽略的影响因素，而

4、肾阳虚证在老龄人群中占有较大比例。结合多年“证候－基因组”研究的经验，笔者选用国际公认的美国Affymetrix公司的人全基因组表达谱芯片，开展了特定老龄人群肾阳虚证的差异基因表达谱的分析研究，探讨老龄肾阳虚证所涉及的分子生物学过程，为进一步揭示肾阳虚证的本质奠定基础。1研究对象在60岁以上老龄人群肾阳虚证的流行病学调查过程中筛选了3例肾阳虚证患者，年龄在60～70岁之间，体检无西医诊断的器质性疾病，经中医专家诊断和肾阳虚证量表［2］评分相结合，符合典型肾阳虚证诊断。另外，选取同年龄段、性别一致的3例健康老人为正常对照，此3例对照者经体检，均无西医诊断的器质性疾病，无身体不适症

5、状，并经过中医专家诊断和肾阳虚证量表评分，均无肾阳虚临床表征。2方法2.1提取总RNA分别采取肾阳虚证患者与正常人的空腹静脉血10ml，裂解红细胞，分离获得白细胞，采用Trizol法提取总RNA，并对总RNA进行定量、质检。2.2基因芯片检测利用单轮cRNA扩增、生物素标记法对样品进行靶标制备，然后用于芯片杂交；芯片采用美国Affymetrix公司的HG-u133Plus2.0基因表达谱芯片，每例样品检测1张，共6张。用FluidicsStation450进行洗脱和染色，然后用Scanner3000扫描芯片；用GeneChipOperatingsoftetrix公司寡核苷酸芯片

6、检测结果已得到国际权威学术界的公认。采用成组T检验的方法分析结果，用foldchange大于1.5或者小于0.6667，pvalue小于0.05，得到肾阳虚证组与健康对照组间的差异表达基因34个，其中表达水平下调的有28条基因，表达水平上调的仅有6条基因。见表2。3.2.2肾阳虚证差异表达基因的聚类分析采用Cluster3.0对上述34条基因进行聚类分析，如图1所示。肾阳虚证组和健康对照组间有6条基因有明显的组间辨识特征。见表3。表16例样本肾阳虚证各症状因子及其定量评分结果（略）sh1，sh2，sh3为3例典型肾阳虚证患者，肾阳虚证半定量诊断总分值分别为36，29，36;h1

7、，h2，h3为3例健康对照者，肾阳虚证半定量诊断总分值分别为3，2，5表2肾阳虚证差异表达基因（略）表3肾阳虚证特征差异表达基因（略）图1肾阳虚证差异表达基因聚类图（略）4讨论4.1实验的质量控制既往对肾阳虚证病机、诊断、治疗、生理、生化、神经-内分泌-免疫调控等研究，提示该证很可能涉及一大群差异表达基因，拥有复杂而独特的分子生物学内涵［4］。基因芯片以大规模、高通量的方式可同时研究多个基因及多个基因组在各种生理病理状态下的表达，以了解基因及基因组之间的相互作用和调控网络，有利于研究肾阳虚证