正交实验法筛选千斤拔多糖的提取分离工艺论文

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1、正交实验法筛选千斤拔多糖的提取分离工艺论文【摘要】目的研究千斤拔多糖的提取分离的最佳工艺条件。方法采用正交设计法筛选。结果千斤拔多糖的最佳提取分离工艺为：采用加热回流法，石油醚（30～60℃）回流3h；滤渣用乙醚回流5h；滤渣用95%乙醇回流5h，滤渣用18倍量提取3次，2h/次，提取液浓缩至10ml，加入乙醇后使溶液中乙醇的浓度约为90%，静置8h后抽滤，真空干燥即得千斤拔多糖粗品。结论该实验为千斤拔多糖的提取分离的条件提供了参考.freelacrophylla(oghaniaferruginea(oghania

2、philippinensis(Merr.etRolfe)Li.的根。苯酚试剂［5］:取苯酚（CP）150g，加铝片0.2g和碳酸氢钠1.0g，蒸馏，收集182℃馏份。称取10g，加水200ml溶解，置棕色瓶内放冰箱中备用。2方法以改良苯酚-硫酸法［5］测定千斤拔多糖的含量。2.1线性关系考察2.1.1葡萄糖标准溶液的制备精密称取干燥至恒重的葡萄糖标准品70mg，用水稀释成为700μg·ml-1的对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5ml置50ml容量瓶中，用水稀释至

3、刻度，再精密吸取2.0ml于具塞试管中。各管精密加入4.0%苯酚溶液［3］1.0ml，摇匀，迅速分别滴加浓硫酸7.0ml，摇匀后放置5min，置沸水浴中加热15min，取出冷至室温后，于490nm处测定吸光度值。以浓度C(μg·ml-1)为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程：A=0.0046C-0.0058,r=0.9996(n=6)。结果表明，在2.86～10.01μg·ml-1之间，葡萄糖浓度与吸收度值具有良好的线性关系。2.1.2粗多糖样品溶液的制备精密吸取定容后的粗多糖溶液20ml置100ml容

4、量瓶中，稀释至刻度，精密吸取2ml显色，备用。2.2精密度（重复性）实验取同一样品（S1）溶液，重复测定吸光度6次，RSD为1.26%。结果表明方法精密度（重复性）良好。2.3稳定性实验取样品溶液，每隔0.5h测定吸光度值，连续4h，RSD为1.07%。结果表明样品稳定性良好。2.4加样回收实验精密称取已知多糖含量的粗多糖溶液1ml，3份，依次加入不同量的葡萄糖对照品溶液，取“2.1.1”项下的对照品溶液，按“2.1.1”项下测吸光度供试品溶液的制备方法，自“各管精密加入4.0%苯酚溶液1.0ml”起，依法操作，测

5、得样品吸光度值，根据标准曲线求多糖的含量，并以葡萄糖标准溶液作对比测定，计算多糖回收率为98.73%，RSD为1.41%（n=9）。2.5提取物中多糖含量测定精密吸取定容后的粗多糖溶液20ml置100ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，精密量取2.0ml置10ml具塞试管中，按“2.1.1”项下测吸光度供试品溶液的制备方法，自“各管精密加入4.0%苯酚溶液1.0ml”起，依法操作，测得样品吸光度值，根据标准曲线求多糖的含量。粗多糖得率(%)=沉淀重量×多糖含量÷称样量×100%。3结果3.1单因素考察3.1.1考察石

6、油醚、乙醚、乙醇脱脂的必要性取千斤拔干燥粉末7份，精密称定，一份直接用水回流提取；一份用石油醚（30～60℃）回流6h。滤过，取滤渣，挥去溶剂后用水回流提取；一份用石油醚提取，药渣挥去溶剂后用乙醚回流提取6h，药渣挥去乙醚后用水回流提取；一份直接用乙醚直接回流提取6h，药渣挥去乙醚后用水回流提取；一份用石油醚提取，药渣挥去溶剂后用乙醚回流提取6h，药渣挥去乙醚，再用95%乙醇回流6h，药渣挥去乙醚后用水回流提取；一份直接用95%乙醇直接回流提取6h，药渣挥去透剂后用水回流提取；一份用石油醚提取，药渣挥去溶剂后用95

7、%乙醇回流提取6h，药渣挥去溶剂后用水回流提取。结果显示用石油醚、乙醚、95%乙醇都回流提取后，脱脂效果最好。3.1.2考察石油醚、乙醚、95%乙醇回流时间分别逐步考察千斤拔药材分别经石油醚、乙醚、95%乙醇回流2，3，4，5，6，7h后，滤过，溶液在200～400nm进行全波长扫描。确定其最佳回流时间。结果表明，石油醚的最佳提取时间为3h；乙醚的最佳提取时间为5h；95%乙醇的最佳提取时间为5h。3.1.3考察不同的提取温度对千斤拔多糖粗品提取量的影响称取千斤拔干燥粉末约5g，5份，精密称定，各精密加入100ml

8、石油醚，分别回流3h，过滤，药渣挥去石油醚，分别精密加入100ml乙醚，分别回流5h，过滤，药渣挥去乙醚，分别精密加入95%乙醇100ml，分别回流5h，过滤，挥干药渣，分别于药渣中加入100ml水，一份直接加热使沸腾回流2h，另4份滤渣分别用60，50，80，90℃的水温浸2h。滤过后，滤液定容至500ml，按“2.5”项下方法测定。结果表明，沸水回流者所