高效液相色谱法测定田七花叶颗粒中人参皂甙rb1含量

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1、高效液相色谱法测定田七花叶颗粒中人参皂甙Rb1含量【摘要】目的：建立田七花叶颗粒中人参皂甙Rb1的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱(AgilentThermoODSC18柱)，4.6×250mm;流动相：乙腈―0.2%磷酸(32：68);检测波长：203nm;柱温：40℃;流速：1.0ml/min;结果：该方法不受处方中其他成分的干扰，人参皂甙Rb1在104μg/ml～1300μg/ml之间呈良好线性关系。(r=0.999990)，稳定性､重复性良好。平均回收率97.0%，RSD为0.67%。结论：该方法操作方便，准

2、确可靠。可用于测定田七花叶颗粒中人参皂甙Rb1的含量。【关键词】：高效液相色谱法田七花叶颗粒人参皂甙Rb1【中图分类号】R96;R446【文献标识码】B【文章编号】1007-8517(2008)4-0028-047田七花叶颗粒收载于《部颁标准》中药成方制剂第二十册[1]，药物成方为三七叶茎花。属解热镇痛､抗炎药。标准未收载[含量测定]项目。参考有关资料[2]，三七叶茎花中含有的主要化学成分是人参皂甙Rb1，人参皂甙Rg1，和三七皂甙R1。作者用高效液相色谱法对田七花叶颗粒中人参皂甙Rb1的含量进行测定，为有效评价田七花叶颗粒的质量提供了方法。1仪器及试药

3、1.仪器LC―2010AHT高效液相色谱仪､Class-Vp工作站､UV―VIS检测器。UV-265FW紫外可见分光光度计。1.试剂人参皂苷Rb1：中国药品生物制品检定所提供，批号为110704-200319，供含量测定用;乙腈：进口色谱纯;磷酸：分析纯;水：乐百氏纯净水;供试样品：田七花叶颗粒14批次。分别是：云南永孜堂药业有限公司(10批次);云南老拨云堂药业､云南植物药业､云南铭鼎药业､昆明中药厂各1批次。2方法与结果2.色谱条件色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱(AgilentEclipseTh

4、ermoODSC18柱)，4.6×250mm;流动相：乙腈―0.2%磷酸(32：68);检测波长为203nm;柱温：40℃。流速：1.0ml/min。在此条件下，人参皂苷Rb1与其他组分能达到良好分离。2.提取溶剂选泽根据人参皂苷Rb1的性质，选用乙醇作为提取溶剂。2.3提取方法､时间的比较7提取方法比较了超声处理(功率250W，频率50kHz)20～40分钟及回流提取30分钟，结果表明超声处理30分钟已提取完全，故选用简便､快捷的超声处理30分钟作为前处理方法。见表1。2.4对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Rb1对照品0.2600g，置5

5、0ml容量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度(5.2mg/ml)，作为贮备液。取储备液1ml于10ml容量瓶中，加乙醇稀释至刻度，为对照品溶液(0.52mg/ml)。2.5供试品溶液的制备取本品装量差异项下的内容物，研细(或粉细)过4号筛，混匀，取20g，精密称定，置具锥形瓶中，精密加入乙醇50ml，密塞，称定重量，摇散，摇匀，超声处理30分钟(每10分钟取出摇散一次)，放冷，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，水浴蒸至近干，加乙醇使溶解，并转移至5ml容量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，即得。2.6测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱

6、仪，测定，即得。2.7空白试验取处方中除三七叶浸膏外辅料，按处方剂量及制法和工艺要求制备缺三七叶浸膏的空白样品，照含量测定项下供试品溶液的制备方法制成阴性对照样品溶液，同法进行测定，结果在与对照品人参皂苷Rb1相同的保留时间位置，无其他干扰峰出现，表明除三七叶浸膏外的其他药材对人参皂苷Rb1峰无干扰。图谱见图1。2.8人参皂苷Rb1最大吸收波长的确定7精密吸取上述对照品溶液3ml于50ml量瓶中，用乙醇稀释至刻度。用UV-265FW紫外可见分光光度计描画人参皂苷Rb1的紫外吸收图谱，可见人参皂苷Rb1在203nm波长处有一显著吸收峰，故我们选择203nm作为人参皂苷R

7、b1的检测波长，这也与有关文献上所收载报道的一致[2]。2.9线性关系与线性范围考察精密吸取上述对照品贮备液2.0､5.0､10.0､15.0､20.0､25.0､50.0ml，分别置100ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀。各注入高效液相色谱仪10ul，按上述色谱条件测定峰面积;以峰面积值为纵坐标，以人参皂苷Rb1进样量(μg)为横坐标作线性回归，绘制标准曲线，得回归方程：Y=181279.48x+4225.25(r=0.999990)，结果表明，人参皂苷Rb1在1.0