吉林省流行麻疹野病毒的核蛋白基因特征论文

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1、吉林省流行麻疹野病毒的核蛋白基因特征论文【关键词】麻疹麻疹是由副粘病毒科麻疹病毒属的麻疹病毒引起的急性传染病〔1，2〕。研究发现，在麻疹病毒的6个结构基因中，除了血凝素蛋白(H)以外，核蛋白(N)的基因变化较大，其中N蛋白序列的羧基端450个核苷酸的区域属于高变区。为此，我们对麻疹病毒的核蛋白基因的分子生物学进行研究，为预测和控制麻疹的发生提供科学依据。1材料与方法11标本收集2004年11月～2005年4月.freell(如有可能，出疹7～10d后再采集1份血)和咽拭子。咽拭子保存在2ml麻疹病

2、毒标本运输液中(含有5%牛血清和终浓度含青霉素2000U/ml、链霉素200μl/ml和制霉菌素25U/ml的细胞培养液)。用于病毒分离的标本，-80℃保存。12病毒分离将标本4℃过夜后取05ml接种于生长良好单层的CD细胞，具有麻疹病毒的细胞受体)，吸附60～120min后弃取上清，换含2%胎牛血清的胎牛血清培养液(DMEM)，培养7～10d，每天观察细胞培养液pH值和细胞病变(CPE)。必要时换液或盲传1代。细胞病变75%时收获冻存。13病毒鉴定用兔抗麻疹免疫血清对分离株作微量中和试验进行鉴定

3、。兔抗麻疹免疫血清(长春生物制品研究所)。14麻疹IgM抗体测定用酶联免疫吸附试验(ELISA)捕捉法检测病人血清中的麻疹IgM抗体，试剂盒(德国维润赛润生物试剂有限公司和北京贝尔生物工程公司)。15逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、序列测定和基因分型采用酚-氯仿抽提液法提取麻疹病毒悬液中的病毒核糖核酸。参照美国疾病预防控制中心引物〔3〕。每次试验用去离子水作为阴性对照，扩增后的产物经2%琼脂糖凝胶电泳鉴定。逆转录酶和TaqDNA聚合酶(美国Biolab公司)。扩增后的PCR产物经纯化后，送上

4、海生工生物技术服务有限公司完成测序工作。调出GenBank里的22个基因型代表株N基因羧基端450个碱基对序列，用Bio-Edit软件对这些代表株和本研究所分离到的17个毒株的N基因的450个碱基序列进行对比分析，确定基因分型。2结果21麻疹病毒的分离和鉴定2004年11月～2005后4月，共收集经血清学确诊为麻疹暴发和散发病例标本103份，在CD抗体，且滴度迅速上升，使麻疹病毒排毒期在短期内结束。因此，要成功分离出麻疹病毒所使用的标本最好在出疹4d内采集。1998年］.北京：科学出版社，1990

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6、中国流行的分析［J］.中国计划免疫，2003，9(1)：1-8.〔5〕XuinA,RotaJS,etal.NeeaslesvirusesisolatedinthePeople'sRepublicofChina［J］.VirusRes,1998,..54:147-156.〔6〕谢正德，朱贞，许文波，等.北京流行的麻疹野病毒的核蛋白基因特点［J］.中国计划免疫，2002，8：191-195.〔7〕张燕，许文波，朱贞，等.中国2003年流行的麻疹野病毒分子流行病学分析［J］.中国计划免疫，2005，6：

7、165-174.