熊果酸对hl60细胞作用机制初步探究

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1、熊果酸对HL60细胞作用机制初步探究【摘要】目的探讨熊果酸在体外对急性早幼粒白血病HL60细胞增殖抑制和诱导凋亡作用。方法采用体外细胞培养技术，荧光显微镜观察细胞结构变化、MTT法观察细胞生长抑制作用、流式细胞仪检测细胞凋亡及周期变化。结果MTT法证实熊果酸对HL60细胞具有增殖抑制和杀伤效应，并呈浓度和时间依赖性。显微镜下可见HL60细胞出现典型凋亡细胞形态学改变。流式细胞仪检测细胞周期阻滞于G0/G1期。结论熊果酸在体外可抑制急性早幼粒白血病HL60细胞增殖，诱导细胞凋亡。【关键词】熊果酸;HL60细胞;凋亡PrimarystudyontheeffectofUrsolicA

2、cidonHL60cellsLIJian-min，ZHOUGuo-xing，SONGHai-peng，etal.HunanTraditionalChineseMedicalCollege，Zhuzhou412000,China【Abstract】ObjectiveToinvestigateanti-proliferationandapoptosiseffectsofUrsolicAcidonHL60cells.MethodsByculturinginvitroandtreatedwithUA，anti-proliferationeffectswereassessedwithme

3、thylthiazolyltetrazolium(MTT)6colorimetricassayandmorphologyofcellswasobservedunderfluorescencemicroscope.Theflowcytometrywasusedtodetectapoptoticratesandcellcycledistribution.ResultsMTTshowedthatanti-proliferationeffectofUAonHL60Cellsinaconcentrationandtimedependentmanner.Microscopeshowedth

4、atcellpresentedsomemorphologicfeaturesofapoptosis.Theflowcytometryshowedthatafterexposuretodrugscell-cyclewasblockedatG0/G1phase.ConclusionUrsolicAcidinhibitsproliferationofHL60cellandinducesapoptosis.【Keywords】UrsolicAcid；HL60cell；Apoptosis熊果酸(ursolicacid,UA)又名乌索酸、乌苏酸，是广泛存在于芦笋、白花蛇舌草、女贞子、乌梅等

5、天然植物和草药中的五环三萜类化合物，具有抗癌、抗炎、护肝、降血脂、降糖、抗氧化和抗病毒等多种生物学活性。近来研究表明，抗肿瘤活性是熊果酸最主要的药理作用，抗肿瘤作用具有多方面和全方位等特点［1］。研究证明，熊果酸对肺癌细胞A-549、胃癌SGC7901、白血病细胞P-388、L-12106和THP-1等均具有细胞毒性作用［2］，但其作用机制一直未明确。本实验拟用熊果酸干预处理人急性早幼粒白血病HL60细胞，体外培养实验，进一步研究其对HL60细胞的增殖抑制、诱导凋亡作用及机制。1资料与方法1.1材料急性早幼粒白血病HL60细胞由南华大学药物药理研究所惠赠。UA为Sigma公司产

6、品，用二甲基亚砜(dimethylsulfoxide，DMSO)溶解，配制成1mmol/L的浓缩液，冻存于-20℃，临用前用培养基稀释并调整DMSO终浓度为0.06%。四甲基偶氮唑蓝［MTT］为Amresco公司产品。1.2方法1.2.1细胞培养将HL60细胞常规培养于含10%小牛血清的RPMI-1640培养基中，置37℃、5%CO2培养箱中传代培养，取对数生长期细胞用于实验。1.2.2增殖抑制实验HL60细胞以2×104/孔接种于96孔板,用0、10、20、40、80μmol/LUA分别处理24、48、72h后,加入5g/LMTT作用4h。4℃离心,弃上清,加入DMSO振荡溶

7、解后,用荧光酶标仪于570nm波长下读取吸光度值,以0μmol/LUA组为对照组,计算增殖抑制率,增殖抑制率=［(对照组吸光度值-实验组吸光度值)/对照组吸光度值］×100%。1.2.3荧光显微镜细胞形态学观察HL60细胞经0、20、40、80μmol/LUA分别作用24h后，800g/min离心5min，收集细胞，PBS6洗涤，调整细胞数至2×105个／ml，吹打均匀，取25μl悬液加到载玻片上，加5μl吖啶橙染色后置荧光显微镜(波长250~350nm)观察细胞形态。1.2.4流式细胞仪检