长链非编码RNA H19对HL60细胞的生物功能影响和作用机制的初步研究

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1、福建医科大学硕士学位论文分类号：R733.71学校代码：10392学科专业代码：100201学号：2151003263硕士学位论文长链非编码RNAH19对HL60细胞的生物功能影响和作用机制的初步研究Thepreliminaryresearchontheeffectoflongnon-codingRNAH19onthebiologicalfunctionofHL60cellsandMechanism学位类型：医学硕士所在学院：协和临床医学院申请人姓名：刘阳学科、专业：内科学（血液病）导师：沈建箴教授研究

2、起止日期：2016年2月至2018年2月答辩委员会主席：陈志哲教授答辩日期：2018年5月23日二○一八年五月福建医科大学硕士学位论文福建医科大学硕士学位论文目录英文缩略词……………………………………………………………………………1中文摘要………………………………………………………………………………2英文摘要………………………………………………………………………………5前言……………………………………………………………………………………9第一部分敲低H19基因的急性白血病细胞模型的建立及功能检测…………

3、11材料与方法……………………………………………………………………11结果……………………………………………………………………………32讨论……………………………………………………………………………41结论……………………………………………………………………………43第二部分H19基因介导相关生物功能改变的机制的初步研究…………………44材料与方法……………………………………………………………………45结果……………………………………………………………………………51讨论…………………………………………

4、…………………………………54结论……………………………………………………………………………56全文总结……………………………………………………………………………57参考文献……………………………………………………………………………58综述…………………………………………………………………………………61致谢…………………………………………………………………………………71福建医科大学硕士学位论文附录英文缩略词ALacuteleukemia急性白血病AMLacutemyeloidleukemia急性髓细

5、胞白血病M3acutepromyelocyticleukemia急性早幼粒细胞白血病lncRNAlongnon-codingRNA长链非编码RNAImprintedmaternallyH19长链非编码RNAH19expressedtranscriptncRNAnoncodingRNA非编码RNADNMTDNAmethyltransferasesDNA甲基转移酶实时荧光定量聚合酶链RT-qPCRReal-timeQuantitativePCR式反应WBWesternblotting蛋白质免疫印迹cDNAC

6、omplementaryDNA互补DNACRCompleteremission完全缓解率RBRetinoblastomageneRB基因RNAiRNAinterferenceRNA干扰1福建医科大学硕士学位论文长链非编码RNAH19对HL60细胞的生物功能影响和作用机制的初步研究摘要目的：（1）在细胞水平敲低长链非编码RNAH19(Imprintedmaternallyexpressedtranscript)，研究对HL60细胞（急性髓性白血病细胞）生物功能（增殖、凋亡、侵袭、迁移）的影响，为探索靶向诊

7、治某些类型AL（acuteleukemia，AL）提供分子基础依据。（2）研究H19可能作用的下游效应分子，探索靶基因启动子区CpG岛的甲基化修饰情况，从而阐述H19对HL60细胞作用的初步机制。方法：（1）运用RNAi干扰技术，构建pGV248-H19-RNAi-GFP、Puro慢病毒干扰载体，转染HL60细胞。（2）在慢病毒成功转染HL60细胞并取得较高的转染率后，分别用CCK-8法，克隆形成法、流式细胞仪检测敲低H19对HL60增殖的影响。（3）采用苯并咪唑荧光染料（bisbenzimide，Ho

8、echst33258）染色法观察细胞凋亡的形态、流式细胞术检测细胞的凋亡率、蛋白印迹法检测细胞株中凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表达，使用上述方法研究细胞凋亡情况。（4）使用Transwell小室探究H19对HL60侵袭、迁移能力的影响，测量穿膜细胞的OD值以反映穿膜细胞数，从而验证对侵袭、迁移的影响。（5）通过文献检索，筛选H19下游可能调节的靶基因，敲低H19后在细胞水平上用RT-qPCR检测相