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1、何首乌生品与炮制品薄层层析鉴别方法研究论文.freelethodfordistinguishingthecrudeandprocessedRadixofPolygonummultiflorumThunb.byTLC.MethodsSomeofthesamplesdifferentcitiesinChina,someofthemacopoeiastandardorlocalstandard.TLCconditions：5-hydroxymethyl-furfural(5-HMF)atterether(60～
2、90℃)-ethylacetate(1∶1)onasilicaGthinlayerplate,sprayedatogramshomultiflorumThunb.ethodfordistinguishingthecrudeandprocessedPolygonummultiflorumThunb.multiflorumThunb.；TLC；5-hydroxymethyl-furfural何首乌为蓼科植物何首乌PolygonummultiflorumThunb.的干燥块根,经炮制后为制何首乌。2005年版《
3、中华人民共和国药典》(一部)1对何首乌生品与炮制品采用了相同的薄层层析(TLC)鉴别方法,鉴别的对象为何首乌对照药材,也没有涉及具体的化学成分,故而采用TLC鉴别方法无法区别何首乌生品与炮制品。前期研究发现,何首乌炮制后HPLC图谱显示有新的色谱峰出现2,经提取分离和结构鉴定,确定新产生的成分之一为5-羟甲基糠醛(5-HMF)3。本试验以5-HMF为对照品,对采用TLC鉴别方法区别何首乌生品与炮制品的方法进行了研究。1材料薄层扫描成像系统(GEL2020D)。5-HMF为本实验室从制何首乌中提取分离得到(
4、纯度98%以上)。采集或采购的何首乌与制何首乌样品来自安徽巢湖、湖北恩施、广西桂林、山东荣成、北京同仁堂、湖南浏阳、江西九江、广东德庆、山东泰山、福建福田。实验室炮制的何首乌药材采集于广东德庆县德城镇家种品,加工制成何首乌生品,然后依据《中华人民共和国药典》制备黑豆汁蒸、黑豆汁炖和清蒸的制何首乌样品1,另依据地方炮制标准制备黑豆汁高压蒸的制何首乌样品4。不同炮制时间制何首乌样品为采用《中华人民共和国药典》黑豆汁炖法制备8、16、24、32、40h的样品。硅胶G薄层板(青岛海洋化工厂分厂),乙醇、石油醚(6
5、0～90℃)、乙酸乙酯、氯仿、甲醇、磷钼酸、α-萘酚均为分析纯(北京化学试剂公司)。2方法与结果2.1对照品溶液制备取5-HMF对照品,加乙醇制成每1mL含0.5mg的溶液,作为对照品溶液。2.2供试品溶液制备分别取何首乌生品和炮制品粉末(过4号筛)4g,加乙醇40mL,超声处理40min,滤过,滤液蒸干,残渣加水5mL使溶解,过聚酰胺柱(1g,内径10～15mm),用水25mL洗脱,收集洗脱液,40℃以下减压蒸干,残渣加乙醇1mL使溶解,作为供试品溶液。2.3薄层层析条件依2005年版《中华人民共和国药
6、典》(一部)薄层色谱法(附录ⅥB)试验,吸取供试品溶液和对照品溶液各5μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(1∶1)为展开剂,展开,取出,晾干。喷以15%α-萘酚乙醇溶液,在90℃加热至斑点显色清晰,日光下检视。不同炮制方法、相同炮制方法不同炮制时间、不同地区制何首乌色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的紫红色斑点,何首乌生品色谱都没有显示相同颜色的斑点。结果见图1～图3。3讨论由于缺乏统一的炮制规范,全国各省市何首乌炮制方法有多种,有黑豆汁蒸、黑豆汁炖和清蒸,还有高
7、压蒸4等,炮制时间由3h到40h不等。不同炮制方法TLC图谱结果显示,采用黑豆汁蒸、黑豆汁炖和清蒸以及高压蒸法制备的制何首乌样品,在与5-HMF色谱相应的位置上,都显示相同颜色的斑点,而何首乌生品没有显示相同颜色的斑点(见图1)。何首乌采用黑豆汁炖8、16、24、32、40h得到的不同炮制时间的样品,TLC图谱结果显示,与5-HMF色谱相应的位置上,都显示相同颜色的斑点,并且随炮制时间延长,在点样量相同的情况下,斑点的大小逐渐增大(见图2),表明制何首乌中的5-HMF含量随炮制时间延长逐渐升高,与HPLC
8、含量测定的结果一致(结果另文报道)。不同地区采集或采购的3个批次的何首乌生品与10个批次的制何首乌样品TLC鉴别结果显示,在与对照品色谱相应的位置上,制何首乌显示相同颜色的斑点,但各批次相应斑点的大小有一定差异,表明不同地区制何首乌中5-HMF含量存在明显差异,而3个批次的何首乌样品在相应的位置上,没有显示相同颜色的斑点(见图3)。本结果表明,所建立的TLC鉴别方法可以用于区别何首乌与制何首乌。在方法建立过程中,首先参照200
