实验1薄层层析与纸层析

《实验1薄层层析与纸层析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、有效成分的分离纯化与鉴定实验1薄层层析与纸层析一、实验目的与要求1.学习色谱方法的基本原理，掌握常用儿种类型薄层层析板的铺制方法。2.掌握薄层层析和纸层析的原理和操作技术。3.利用薄层层析和纸层析检测植物屮的有效成分二、实验原理色谱技术是运用最为广泛的现代分离分析技术。根据分离原理，色谱技术可分为吸附色谱，分配色谱，离了交换色谱和凝胶色谱。薄层层析多是吸附层析，利川吸附剂对化合物吸附能力的不同而达到分离。吸附料吸附能力的人小与吸附材料自身特性，粒度，水份含量等有关。、根据在制备过程屮是否加入粘合剂，薄层层析分为粘合薄层和不粘合薄层两种。加入粘合剂的为硬板，不加粘合剂的多为软板（

2、也有为硬板的，如纤维素薄层板）。粘合剂常用的有疑甲基纤维素饰（CMC-Na）或锻石膏（G）o加疑甲基纤维素钠制成的薄层板，机械强度好,但对一些需要加热的腐蚀性显色剂不适用。加石膏制备的薄层板机械强度较差，但适合于使用需要加热的腐蚀性显色剂。纸层析是一种分配层析，利用化合物在展开剂和水屮分配系数的不同而达到分离。在展开剂中分配系数大的化合物，其Rf值耍比在展开剂中分配系数小的化合物的Rf值大。影响乩值的因素很多，如薄层的厚度，吸附剂的种类、粒度、活度（吸附能力），展开剂的纯度、组成及挥发性，展开方式（上行或下行），层析缸的形状、大小及饱和程度，外界温度等。但是，在固定的条件下，某

3、化合物的Rf值是一个常数。因此，在条件完全相同的情况下，&值可以作为鉴定和检测该化合物的指标，就像测定熔点或其它物理常数一•样。对吸附薄层来说，待分离的化合物极性越人，被吸附剂吸附越牢固，乩值越小；反之化合物极性小，Rf值大。洗脱剂的极性越大，易被洗脱，出值越大；洗脱剂的极性越小，不易被洗脱，R「值越小。一个化合物在某种己选定的吸附剂所表现的R「值人小，主要取决于展开剂的极性大小，即所使用的展开剂极性大，所得的心值大；展开剂极性小，所得的E值也小。为了获得相同的色谱条件，通常是把未知样和标准样同时滴加在同一块薄板上（或滤纸条±）0在测量&值之而，先把每个斑点的轮廉和中心画出，然

4、后用尺子分别量出每个斑点中心到点样原点之间的距离以及展开剂前沿到点样原点的距离，两者的比值即为对应斑点的R「值。定性鉴定的一般方法是肓接在薄层上比较样品斑点和标准物质的Rf值，或者将斑点玄接洗脱或挖出斑点吸附剂示洗脱，再用仪器进行鉴定。定量的方法是用而积积分肓接测定面积或用薄层扫描仪进行光密度扫描测定。直接课差范I韦I一般为5%左右。也可用间接法测定,即把样品斑点挖出后用合适的溶剂洗脱出來，定容后再用仪器测定，此法谋差范围一-般在3-5%之间。本实验利用薄层层析和纸层析方法來检测挥发汕、氨基酸、牛物碱、香豆索、黄酮等样品屮几类简单化合物。三、实验仪器与试剂1.仪器：层析槽及层析

5、缸，喷雾器，玻璃板，吸管，微最进样器，毛细管，玻璃棒，米尺，紫外线灯，锻子2・试剂与样品：层析用氧化铝（中性，180冃以上），活度IITII级，薄层层析用硅胶G,微晶纤维素，聚酰胺粉，偶氮苯，对甲基偶氮苯，苏丹黄，苏丹红，对氨基偶氮苯，四氯化碳，正己烷：乙酸乙酯（9：1）,苯，薄荷油，薄荷脑乙醇溶液，香草醛-60%硫酸试剂,正丁醇：醋酸：水二7：1：2,1%芦丁醇溶液，槐米提取液，乙醇：水=4:1,碱氯仿溶液,东萇若碱氯仿溶液，氯仿，无水乙醇，改良碘化钮钾试剂，正丁醇，醋酸，可溶性淀粉，小糜碱醇溶液，黄连醇提取液，秦皮乙素醇溶液，秦皮醇提取液，芦丁醇溶液，甲酸，氨水,l%AlC

6、l：i醇溶液，苯-内酮（7:3）,精氨酸、肺氨酸、亮氨酸的饱和界【人j醇溶液，板蓝根注射液（或板蓝根乙醇提取液），正丁醇：乙酸：水（4：1：1）,0.5%水合即三酮丙酮液，2%酒石酸，2%苹果酸，正丁醇：甲酸：水（20：3：2）,0.04%滉甲酚绿的95%乙醇液。四、实验内容与步骤L薄层层析板铺制最常用的薄层板是玻璃板，其大小可根据样品量、组分种类和数目、展开方式來确定。检测用小板或狭长板（7.5X2.5cm；20X2.5cm）,制备性分离常用较大规格的薄板（如4020cm）。铺制时可川加粘合剂或不加粘合剂的吸附剂。可川湿法或干法铺制，川湿法铺制获得的薄层板比较均匀，易操作。这

7、里选用湿铺法铺板。先川合适溶剂（水或乙醇）将吸附剂调成均匀糊状，再小心铺制。调糊方法：用石膏作粘合剂的吸附剂如硅胶G、氧化铝G、硅胶GF刈或不含粘合剂的吸附剂如硅胶H、氧化铝H的调制，均是取1份吸附剂，加人2-5份水，用玻棒调匀后即可涂铺。用竣甲基纤维素钠作粘合剂时，収硅胶H（200-250目）加入0.5%竣甲基纤维素钠2份⑴，充分调匀后可涂铺。用纤维素时，取纤维素粉1份，加水或丙酮5-6份调糊均匀。用聚酰胺时,每g加6mL85%甲酸,搅拌溶解后加70%乙醇4mL调匀后即可涂铺。铺制方法：有